Um novo modelo de isolamento do tumor de Walker utilizando o gradiente de Ficoll-Hypaque / A novel model for isolation of Walker's tumoral cells using the Ficoll-Hypaque gradient

RESUMO

OBJETIVO: Analisar uma nova técnica de isolamento das células do tumor de Walker, utilizando o gradiente de ficoll-hypaque. MÉTODOS: Vinte ratos Wistar machos foram divididos em 2 grupos (G1, G2). O tumor do animal doador foi dissecado, triturado em solução de ringer lactato e filtrado. A suspensão celular obtida foi dividida em duas alíquotas (A1 e A2) e a alíquota A2 foi centrifugada em gradiente de ficoll-hypaque. As duas alíquotas foram ajustadas para uma concentração de 1X10(6) células/ml. Um ml da suspensão A1 ou A2 foi injetado por via subcutânea na axila direita dos ratos dos seus respectivos grupos. Os diâmetros tumorais, peso tumoral e análise histológica foram avaliados. RESULTADOS: Não houve diferença no volume tumoral (G1=17,9±3,8cm³; G2=17,2±4,4cm³; p=0,190) e no peso tumoral (G1=7,0±1,8g; G2=7,3±2,8g; p=0,569). A análise histológica evidenciou padrões semelhantes de infiltração de células pequenas indiferenciadas e de necrose nos dois grupos. Entretanto, exsudato granulocítico leve a moderado foi mais acentuado no G2 do que no grupo G1 e hemorragia leve a moderada foi observada somente no grupo com ficoll. CONCLUSÃO: O gradiente de ficoll-hypaque é uma técnica adequada de isolamento das células do tumor de Walker e fornece uma suspensão celular menos contaminada com outros tipos celulares. (AU)

ABSTRACT

PURPOSE: The purpose was to evaluate a novel technique for isolation of Walker's tumoral cells using a Ficoll-Hypaque gradient and its further influence on tumor development.METHODS: Twenty male Wistar rats have been divided in 2 groups G1= without ficoll, G2= with ficoll. Tumor was excised, homogenized and suspended in lactate ringer. A sample of the cell suspension was adjusted at a concentration of 1X106 cells/ml (G1). A second sample was centrifuged on a Ficoll-Hypaque gradient and the cell concentration was then adjusted (G2). Tumor was implanted by subcutaneous injection of 1.0 ml in the right armpit of rats. Tumor volume (TV) and tumor weight (TW) were compared in two groups.RESULTS: There were no differences between the two groups in TV (G1=17.9±3.8cm3 vs. G2=17.2±4.4cm3; p=0.190) and TW (G1=7.0±1.8g vs. G2=7.3±2.8g; p=0.569). The histological analysis showed similar patterns of infiltration by small-undifferentiated cells and necrosis in both groups. However, a mild to moderate granulocytic exsudate was more frequent in the animals whose tumors derived from Ficoll-isolated cells. Hemorrhage from slight to moderate was only observed in this group.CONCLUSION: A Ficoll-Hypaque gradient can provide more adequate isolation of Walker's tumor and the cell suspension obtained by this technique has lower contamination by other cell types.(AU)