Development of a qPCR to diagnose the genus Eimeria in bovines / Desenvolvimento de uma qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria em bovinos

ABSTRACT

Bovine coccidiosis is caused by protozoa of the genus Eimeria. These protozoa mainly affect young animals, causing a decrease in production and consequent economic losses. The routine diagnosis is made through morphological observation of the oocysts, which has several limitations. The objective of the present study was to develop a qPCR technique for the diagnose of Eimeria spp. in cattle. For this purpose, the 18S rRNA region of the DNA of these parasites was selected, since it is a region with low variability among the species. The qPCR was developed using the SYBR Green, resulting in a PCR with a high sensitivity, able to amplify samples containing only one oocyst of Eimeria spp. of bovines. The feasibility of using qPCR in the diagnosis of the Eimeria Genus is demonstrated in this study, once this technique shows to be less laborious and needs less skills for diagnostic training when compared to the technique conventionally used in theroutine (micromorphometry).

RESUMO

A coccidiose em bovinos é causada por protozoários do gênero Eimeria. Estes protozoários acometem principalmente animais jovens, causando diminuição de produção e consequente perdas econômicas. O diagnóstico de rotina é realizado através de observação morfológica dos oocistos, que possui várias limitações. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma técnica de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos. Para isto foi selecionada a região 18S rRNA do DNA destes parasitas, pois a mesma é uma região com pouca variabilidade entre as espécies. A qPCR foi desenvolvida com a utilização de SYBR Green, tendo como resultado uma PCR com uma alta sensibilidade, capaz de amplificar amostras contendo apenas um oocisto de Eimeria spp de bovinos. Demonstra-se nesse estudo a viabilidade na utilização da qPCR no diagnóstico do gênero Eimeria, sendo esta técnica menos laboriosa e com menos necessidade de treinamento para diagnóstico quando comparada com a técnica convencionalmente utilizada em rotina (micromorfometria).