Treatment of serum with supernatants from cultures of Candida albicans reduces its serum-dependent phagocytosis

ABSTRACT

Candida albicans is a potent activator of the complement system, and heat labile opsonins produced by activation of C3 (C3b and iC3b) enhance phagocytosis of C. albicans mediated by complement receptors. In this study we treated mouse serum with supernatants from cultures of a protease producer strain of C. albicans and evaluated the ability of this serum to enhance phagocytosis of C. albicans. Cell-free supernatants from cultures of C. albicans were concentrated 5 fold and added to mouse serum for 30 min at 37ºC, before using this serum for opsonization of glutaraldehyde-fixed yeast cells. We observed that normal mouse serum increased about 3 fold the phagocytosis of C. albicans by mice peritoneal macrophages, whereas supernatant-treated serum did not increase phagocytosis. This effect of supernatants on serum was prevented by addition of pepstatin (5 µg/ ml; an inhibitor of C. albicans acid proteases) to the medium. Serum treated with supernatants from cultures of a protease-deficient mutant of C. albicans also increased about 3 fold phagocytosis of the yeast. These results suggest that a protease produced by C. albicans causes proteolysis of serum opsonins, thereby reducing the phagocytosis of the yeast.

RESUMO

Candida albicans é um potente ativador do sistema complemento, e opsoninas lábeis ao calor produzidas por ativação de C3 (C3b e iC3b) aumentam a fagocitose de C. albicans mediada por receptores de complemento. Neste estudo, tratamos o soro de camundongo com sobrenadante de culturas de uma cepa de C. albicans produtora de proteases e avaliamos a capacidade deste soro reduzir a fagocitose de C. albicans. Sobrenadantes livres de células obtidos de cultura de C. albicans foram concentrados 5 vezes e adicionados ao soro de camundongo por 30 minutos a 37ºC, antes deste soro ser usado para opsonização de C. albicans na forma de levedura e fixadas em glutaraldeido. Nós observamos que soro normal aumentou 3 vezes a fagocitose de C. albicans por macófagos peritoneais, enquanto que o soro tratado com sobrenadante não aumentou a fagocitose. Este efeito do sobrenadante sobre o soro foi evitado por adição de pepistatina (5 µg/ml; um inibidor de proteinase ácida) ao meio. Soro tratado com sobrenadantes de culturas de um mutante de C. albicans deficiente em produção de proteinase também aumentou em 3 vezes a fagocitose da levedura. Estes resultados sugerem que uma proteinase produzida por C. albicans causa proteólise de opsoninas do soro, desta maneira reduzindo a fagocitose da levedura.