Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for the serological diagnosis of the bovine herpesvirus 1 infection / Desenvolvimento e avaliação de um ensaio imunoenzimático para o diagnóstico sorológico da infecção pelo herpesvírus bovino 1
C. Ferreira, Melissa; C. Médici, Kerlei; F. Alfieri, Alice; A. Alfieri, Amauri.
Semina Ci. agr.;
26(3): 363-372, 2005.
Artigo
em Português
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| ID: vti-472305
Resumo
An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using non-purified antigen was developed for serological diagnosis of the bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection. Some blocking substances to prevent nonspecific reactions were evaluated in different concentrations and combinations. The best results were obtained using 5% skim milk powder as blocking solution and the serum/conjugated buffer added with 10% MDBK cells, 10% equine serum, 1% skim milk powder. The system was evaluated with a collection of positives (n=60) and negatives (n=62) bovine serum previously analyzed by seroneutralization (SN) technique for the BoHV-1 antibodies. The indirect ELISA standardized showed 98.3% of sensitivity and 95.2% of specificity (kappa: 0.93) when compared with the SN technique. These results would allow its implantation in the laboratorial routine for the serological diagnosis of the BoHV-1 infection. The use of non-purified antigen in ELISA facilitate the elaboration, reduces the production cost and makes possible the application of these technique in seroepidemiological study of the BoHV-1 infection in cattle herds.Um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto utilizando antígeno não purificado foi desenvolvido para o diagnóstico sorológico da infecção pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1). Nos experimentos de padronização várias substâncias bloqueadoras de reações inespecíficas foram avaliadas em diferentes concentrações e associações. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se leite em pó desnatado (5%) como solução de bloqueio e o tampão de diluição dos soros/conjugado acrescido de células MDBK (10%), soro de eqüino (10%) e leite em pó desnatado (1%). O sistema foi avaliado frente a uma coleção de soros bovinos positivos (n=60) e negativos (n=62) para o BoHV-1 por meio da técnica de soro-neutralização (SN). O ELISA indireto padronizado nesse estudo, quando comparado com a SN, apresentou 98,3% de sensibilidade e 96,8% de especificidade (kappa: 0,93), valores que possibilitam a sua implantação na rotina laboratorial para o diagnóstico sorológico da infecção pelo BoHV-1. O desenvolvimento de um sistema de ELISA indireto utilizando antígeno não purificado facilita a elaboração da técnica, reduz o custo de produção e possibilita a sua aplicação em inquéritos soroepidemiológicos da infecção pelo BoHV-1 em rebanhos bovinos.
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