Viabilidade in vitro de células espermáticas ovinas submetidas a diferentes diluentes e a refrigeração / In vitro viability of ovine sperm cells submitted to different diluents and refrigeration

RESUMO

Avaliou-se a viabilidade in vitro de células espermáticas após a adição de três diluentes comerciais, que foram comparados com o diluente tradicional Tris-gema, utilizados no processo de refrigeração do sêmen ovino, em até 48h de armazenamento. Foram utilizados nove ejaculados diários, obtidos de três reprodutores Dorper, com vagina artificial, em três repetições com intervalo de três dias. O sêmen foi mantido a 30ºC, e foram avaliadas suas características macro e microscópicas. Após formação do pool, repetiram-se as avaliações acrescidas da concentração espermática e da integridade do DNA e do acrossoma. Dividiu-se o pool em cinco tratamento, cada um constituído de uma parte de sêmen para três partes dos respectivos diluentes Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Gema- Equimix com gema de ovo (DIV) e Tris-Gema (DV). O material obtido em cada tratamento foi subdividido em quadruplicata, refrigerado e mantido a 4ºC até as avaliações da motilidade individual progressiva (MIP), do vigor e da integridade do DNA e do acrossoma, correspondendo a zero, 12, 24, 36 e 48h. Nas avaliações do sêmen, com o DI ocorreu a maior queda de MIP às 12h em relação aos demais grupos (P<0,05). Às 24h, os tratamentos DII, DIV e DV apresentaram a melhor MIP (P<0,05), que não divergiram (P>0,05) entre si; às 48h, o DII e o DV foram melhores (P<0,05) que os demais. Com relação ao vigor, os tratamentos DII e DV apresentaram valores mais elevados (P<0,05) em relação ao DI e DIII, a partir das 12h, e ao DIV, a partir das 24h (P<0,05). Concluiu-se que o diluente Laiciphos Green Ovine, da mesma forma que o Tris-gema, pode ser utilizado na conservação do sêmen a 4ºC por 48h, enquanto o Equimix, acrescido de 20 por cento de gema de ovo, pode ser seja utilizado no armazenamento do sêmen (4ºC) por até 24h.(AU)

ABSTRACT

The in vitro viability of sperm cells following the addition of three commercial diluents was evaluated and compared with the traditional Tris-yolk diluent for the refrigeration of ovine sperm up to 48h of storage. Nine daily ejaculates were obtained from three Dorper breeders using an artificial vagina; three repetitions were performed in a three-day interval. The semen was kept at 30ºC and macro and microscopic characteristics were evaluated. The samples were pooled and the evaluations were repeated, along with assessments of sperm concentration, DNA integrity, and acrosome integrity. The pool was distributed into five treatments, each with one part of semen to three parts of the following diluents Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Yolk-Equimix with egg yolk (DIV), and Tris-Yolk (DV). The material of each treatment was aliquoted in quadruplicate, refrigerated, and maintained at 4ºC until the evaluations of the individual progressive motility (IPM), vigor, DNA integrity, and acrosome integrity, corresponding to 0, 12, 24, 36, and 48h. The highest decrease of IPM occurred with DI (at 12h) in comparison to the other diluent groups (P<0.05). At 24h, DII, DIV and DV had the best IPM (P<0.05) and did not diverge from one another (P>0.05). At 48h, DII and DV had the highest values (P<0.05). Regarding vigor, DII and DV had higher values (P<0.05) than DI and DIII at 12h and higher values than DIV at 24h (P<0.05). From the results, like Tris-Yolk, and Laiciphos Green Ovine can be used for the conservation of semen at 4ºC for 48h, whereas Equimix plus 20 percent egg yolk may be used for the storage of semen at 4ºC for up to 24h.(AU)