Determinación de la concentración de Mycobacterium por espectrofotometría / Determination of Mycobacterium fortuitum concentration by spectrophotometry / Determinação da concentração de Mycobacterium fortuitum através da espectrofotometria

RESUMEN

Mycobacterium fortuitum es agente causante de enfermidad oportunista en humanos y animales. Es un agente biológico modelo para estudios experimentales que sustituy Mycobacterium bovis, que es más patógeno. Este estudio presenta una metodología alternativa para el recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro de inóculo para determinar la concentración de Mycobacterium fortuitum usando espectrofotometría. Catorce muestras se utilizaron Mycobacterium fortuitum, cultivadas en Lowesntein-Jensen, ocho de ellos de siete días de cultivo, y la otra entre 8 y 14 días en la cultura. Todas las muestras se colocaron en placas y se incubaron a 37o.C durante 7 días en un invernadero. De cada muestra se hicieron lecturas las variables de absorbancia (Abs) y transmitancia (T%) en un espectrofotómetro, a una longitud de onda de 560 nm y 600 nm. La comparación de los valores de UFC, ABS y T% por análisis de regresión lineal simple, el estadístico SAS versión 8.2 del software, hubo una fuerte evidencia estadística de que el aumento del valor de transmitancia se asocia con la disminución en el valor de UFC chapado, siguiendo el modelo matemático LOG10 (UFC) = 21,012 - 0,1936 * transmitancia, con p = 0,0025 y una repetibilidad de más de 80%.(AU)

ABSTRACT

Mycobacterium fortuitum is an opportunistic agent which causes disease in human and animals. It is also a biological model for experimental studies instead of using Mycobacterium bovis, which is more pathogenic. This work presents an alternative methodology using spectrophotometry to count colony forming units (CFU) per milliliter of inoculum, in order to determinate Mycobacterium fortuitum concentration. Fourteen Mycobacterium fortuitum samples were cultivated in Lowenstein-Jensen culture media, considering that eight of them were seven days old cultures and the others were between eight and 14 days old. All samples were seeded and incubated at 37o.C for 7 days in an incubator. For each sample, the variables absorbance (Abs) and transmitance (T%) were read with an spectrophotometer and wave length of 560nm and 600nm. When the values of CFU, Abs and T% were compared through simple linear regression analysis and using the statistic software SAS Version 8.2., it was observed strong statistical evidence that the increase of transmitance value is associated to the decrease of CFU plate values, according to the mathematic model LOG10 (CFU) = 21.012 - 0.1936*Transmitance, and p value = 0.0025 and a repeatability over 80%.(AU)

RESUMO

O Mycobacterium fortuitum é um agente oportunista causador de doença em humanos e animais. Além disso, é um modelo biológico para estudos experimentais em substituição ao Mycobacterium bovis, que é mais patogênico. Este estudo apresenta metodologia alternativa à contagem de unidades formadoras de colônia por mililitro de inóculo, para determinar a concentração do Mycobacterium fortuitum utilizando espectrofotometria. Utilizaram-se 14 amostras de Mycobacterium fortuitum, cultivadas em meio Lowesntein-Jensen, sendo oito delas com sete dias de cultivo e as demais entre oito e 14 dias de cultivo. Todas as amostras foram semeadas e incubadas a 37o.C por 7 dias em estufa. Fizeram-se, de cada amostra, leituras das variáveis absorbância (Abs) e transmitância (T%) em espectrofotômetro, nos comprimentos de onda de 560nm e 600nm. Comparando-se os valores obtidos de UFC, Abs e T% por meio da análise de regressão linear simples, pelo programa estatístico SAS versão 8.2, observou-se forte evidência estatística que o aumento do valor da transmitância está associado com o decréscimo do valor de UFC em placas, seguindo o modelo matemático LOG10 (UFC) = 21.012 - 0.1936*Transmitância, com valor de p = 0,0025 e uma repetibilidade de mais de 80%.(AU)