CONGELAMENTO ULTRA-RÁPIDO DE EMBRIÕES Mus musculus COM A UTILIZAÇÃO DE SACAROSE E LACTOSE
Lourdes Faculdade de Agronomia Departamento de Zootecnia) Bernardi, Mari; lolanda Batistella Departamento de Clínica de Grandes Animais) Rubin, Mara; Metzdorf, André.
Ci. Rural;
22(3)1992.
Artigo
em Português
| VETINDEX
| ID: vti-702800
Resumo
One hundred and six Swiss Albin CF1 mouse morulae were frozen by ultra rapid method. The embryos were colected 76-78h after HCG administration and the freezing was done in glycerol 2.0M + sucrose 0.25M (Group S) or in glycerol 2,0M + lactose 0,25M (Group L), both in Modified Dulbecco' s Phosphate Buffered Saline (PBS). Firstly, the embryos were placed in a equilibration medium containing 2.0M glycerol for 4 minutes after which the morulae were transfered to a freezing solution for 1 minute. The embryos were loaded in groups of 5 to 11 in 0.25ml plastic straws. These straws were maintained for 2 minutes in nitrogen vapour and then plunged into liquid nitrogen. After thawing at 37°C for 20 seconds, one hundred and three morulae were recovered. The cryoprotectant was diluted in 0.5M sucrose solution (Group S) or 0.5M lactose solution (Group L), for 5 minutes at room temperature. After three baths in PBS the viable embryos were cultured in Modified PBS at 37°C, for 44-48h. Through morphological evaluation, 45 (86.5%) and 46 (90.2%) morulae were considered viable after the cryoprotectant dilution in the groups S and L, respectively. The development rate was 67.3% (n=52) with Group S and 64.7% (n=51) with group L. No significant differences (P >0,01) were observed in embryo viability or in survival rate after thawing and culturing, with both sugars.Cento e seis mórulas de camundongos da cepa CF1 Suíço Albina, coletadas 76-78h após a administração de HCG, foram congeladas em solução de congelamento contendo glicerol 2,0M + sacarose 0,25M (Grupo S) ou Glicerol 2,0M + lactose 0,25M (Grupo L), ambas em PBS modificado. Foi efetuado um pré-tratamento com Glicerol 2,0M durante 4 minutos, sendo as mórulas transferidas, posteriormente, para a solução de congelamento, durante 1 minuto. O envase foi realizado em palhetas de 0,25ml em grupos de 5 a 11 mórulas. As palhetas contendo os embriões foram colocadas em vapor de N2 durante 2 minutos e, após, mergulhados em N2 líquido. O descongelamento foi efetuado em banho-maria a 37°C por 20 segundos e foram recuperadas 103 mórulas após a diluição do crioprotetor, que foi efetuada em solução de sacarose 0,5M (Grupo S) e lactose 0,5M (Grupo L) , durante 5 minutos , à temperatura ambiente . Após três banhos em PBS, os embriões viáveis foram colocados em cultivo em PBS modificado, a 37°C, por 44-48h. Através da avaliação morfológica, após descongelamento, 45 mórulas (86,5%) foram consideradas viáveis no grupo S e 46 (90,2%) no grupo L. O percentual de embriões que se desenvolveram após cultivo foi de 67,3% para o grupo S (n =52) e 64,7% para o grupo L (n =51). A análise estatística não revelou diferenças significativas (P >0,01) no número de embriões viáveis após descongelamento e índice de sobrevivência após cultivo, entre os dois açúcares testados.
Biblioteca responsável:
BR68.1
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