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R. Ci. agrovet.; 17(3): 361-367, 2018. tab, ilus

Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-738576

Resumo

Several protocols to extract plant DNA exist, which can provide varying concentrations and quality of DNA due to the interaction between the protocol components and plant tissue compounds that affect the extraction, such as polyphenols and proteins. The objective of this study was to test the efficiency of different protocols for extracting DNA from apple tree leaves. Three DNA extraction protocols were tested: FastDNA® SPIN Kit - MP Biomedicals; adaptation from Qiagen DNeasy® Plant Mini Kit; adapted CTAB. Fresh and frozen young leaves of the genotypes M-10/09, SCS426 Venice and SCS427 Elenise were used. The purity and concentration of the DNA were analyzed using a spectrophotometer. The DNA extracted was tested using PCR with one primer related to regions of the genome that access transcription factors in apples (SAND). The highest concentrations of DNA were provided by the adapted CTAB protocol. Regarding purity, the adaptation from Qiagen DNeasy® Plant Mini Kit and the adapted CTAB protocols were considered satisfactory. Regarding DNA quality verified by PCR, all protocols were efficient for amplification of the target fragments. Therefore, all three protocols can be used for DNA extraction from apple leaves; however, the use of the adapted CTAB protocol showed high efficiency, due to the higher quality and concentration of DNA,with the lowest relative cost in the process of DNA extraction.(AU)

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Existem diversos protocolos para a extração de DNA vegetal, que proporcionam concentrações e qualidade variáveis de DNA em função da interação entre os componentes das soluções de extração e os compostos dos tecidos vegetais interferentes, como polifenois e proteínas. O objetivo da realização do trabalho foi testar a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de folhas de macieira. Testou-se três protocolos de extração de DNA: Kit FastDNA® SPIN da MP Biomedicals; adaptação a partir do Mini Kit DNeasy® Plant da Qiagen; adaptação do protocolo CTAB. Foram utilizadas folhas jovens frescas e congeladas dos genótipos M-10/09, SCS426 Venice e SCS427 Elenise. A pureza e a concentração das amostras de DNA obtidas foram analisadas em espectrofotômetro. O DNA foi testado via reações de PCR com o iniciador SAND, que acessa uma região do genoma da macieira associada a um fator de transcrição. As maiores concentrações de DNA foram proporcionadas pelo protocolo CTAB adaptado. Já quanto à pureza, considerou-se satisfatório o protocolo adaptado a partir do Mini Kit DNeasy® Plant e o CTAB adaptado, enquanto que todos os protocolos foram eficientes para a amplificação dos fragmentos alvo via reações de PCR. Dessa forma, os três protocolos podem ser utilizados para a extração de DNA de macieira a partir de folhas. Contudo, com a utilização do protocolo with the lowest relative cost in the process of DNA extraction.(AU)

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