INFLUÊNCIA DE DIFERENTES pH E CONCENTRAÇÕES DE SUBSTRATO CUTICULAR E NÃO-CUTICULAR NA ATIVIDADE PROTEOLÍTICA DE ISOLADOS DE METARHIZIUM ANISOPLIAE

ABSTRACT

ABSTRACT Proteases produced by Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin are considered an important virulence factor, because they are fundamental in the process of penetration through the insect cuticle. The purpose of the present study was to verify the influence of different pH levels and concentrations of the substrates casein and cuticle of Mahanarva fimbriolata (Stål) (Hemiptera Cercopidae) on the proteolytic activity of isolates of M. anisopliae. Casein and cuticle from adult M. fimbriolata, both in the concentrations of 1%, 2%, 3% and 4%, were added in minimum medium (MM) solid, without a carbon source. To verify pH influence on the proteolytic activity and possible pH change in the media, the media cited above were made with a pH indicator in the concentration that best influenced the proteolytic activity, with pH 5, 6, 7, 8, 9 and 10. The enzymatic activity was determined from the enzyme relation index (ERI). Isolates of M. anisopliae presented distinct optimum concentrations for each substrate, being 1% for casein and 2% for cuticle from Mahanarva fimbriolata. Regarding pH, it was verified that there was greater proteolytic activity in casein with pH 8 and 9 and cuticle from Mahanarva fimbriolata with pH 6, 7 and 8. Beginning at the 5th growth day of the isolates there occurred a pH color change in the medium casein 1% with pH initial 6 and 7 to pH 8. Therefore, the concentration of the substrates studied and the pH of the media had an influence on the proteolytic activity.

RESUMO

RESUMO A produção de proteases por Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin é considerada um importante fator de virulência, pois são fundamentais no processo de penetração através da cutícula do inseto. O objetivo do trabalho foi verificar a influência de diferentes pH e concentrações dos substratos caseína e cutícula de Mahanarva fimbriolata (Stål) (Hemiptera Cercopidae) na atividade proteolítica de isolados de M. anisopliae. Foi utilizado meio mínimo (MM) sólido, exceto fonte de carbono, acrescido de caseína e cutícula de M. fimbriolata, ambos nas concentrações de 1%, 2%, 3% e 4%. Para verificar a influência do pH na atividade proteolítica e possível mudança de pH no meio, os meios citados acima foram preparados na concentração em que foi observada a maior atividade proteolítica, com pH inicial 5, 6, 7, 8, 9 e 10 e contendo indicador de pH. A atividade enzimática foi determinada através do índice de relação enzimática (IRE). Foi observado que os isolados de M. anisopliae apresentaram concentrações ótimas distintas para cada substrato, sendo 1% para a caseína e 2% para a cutícula de M. fimbriolata. Quanto ao pH, foram verificadas maiores atividades proteolíticas em caseína nos pH 8 e 9 e em cutícula de M. fimbriolata nos pH 6, 7 e 8. Foi verificado, a partir do quinto dia de crescimento dos isolados, uma mudança de coloração no meio caseína 1% de pH inicial 6 e 7 para um pH final 8. Portanto, a concentração dos substratos estudados e o pH do meio influenciaram na atividade proteolítica.