Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

RESUMO

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 14000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 13 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 11 e 13. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1500, e pós-descongelado, diluído em 1250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.(AU)

ABSTRACT

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 14000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 13 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 11 and 13 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1500, and post-thawed, diluted 1250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.(AU)