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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-200107

Resumo

A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotécnica reprodutiva utilizada para disseminar as características genéticas da fêmea, sendo uma ferramenta que auxilia no entendimento dos casos de infertilidade, aumentando diretamente o potencial genético dos animais e a produtividade do rebanho. A seleção de touros para a fertilização de oócitos na PIV é de grande importância na garantia de rendimentos aceitáveis desta técnica, contudo, na maioria das vezes, o sêmen utilizado na PIV é criopreservado sendo que durante o processo de criopreservação podem ocorrer danos na membrana espermática, produção excessiva de estresse oxidativo (ROS), maturação e aumento precoce da proporção de espermatozóides capacitados e acrossoma reagidos, sendo associados com a reduzida motilidade, viabilidade, integridade de membrana e baixa fertilidade pós-descongelamento. Alguns estudos têm sido conduzidos a fim de minimizar estas perdas de qualidade após a criopreservação e preservar a capacidade fertilizante das células espermáticas promovendo aumento de sua motilidade e auxiliando na fertilização do ovócito. A pentoxifilina é um fármaco inibidor da fosfodiesterese que tem sido utilizada em técnicas de reprodução assistida por promover aumento da motilidade e consequente maiores taxas de fertilização. Contudo, seu uso em reprodução de bovinos não foi adequadamente estudado. O objetivo do presente estudo foi de verificar se diferentes concentrações de pentoxifilina (10 e 20 mM) melhoram as características do sêmen e consequentemente a fertilização in vitro de embriões bovinos. Foi utilizado o sêmen de quatro touros testados para produção in vitro, passados em gradientes descontinuos de percoll (45 e 90%) e divididos em tratamentos: Controle, com adição de 10 mM e 20 mM, sendo posteriormente utilizados para produção in vitro e análises de motilidade, vigor atividade mitocondrial, capacitação espermática e estresse oxidativo (ROS) dos meios de fertilização e cultivo. O experimento foi realizado em blocos inteiramente casualizados sendo as medias analisadas com nível de significância de 5%. A motililidade e vigor espermáticos diminuíram com a adição de pentoxifilina (P < 0,0001; P = 0,0002) bem como a clivagem (P = 0,0173), produção de blastocistos (P = 0,0424) além do aumento de espermatozoides com reação acrossômica degenerativa (P = 0,0004), porém não se observou diferença na produção de espécies reativas de oxigênio nem na atividade citoquimica mitocondrial (P > 0,005). Conclui-se que o uso de pentoxifilina nas concentrações de 10 e 20 mM foram prejudiciais ao espermatozoide bem como a produção in vitro de embriões bovinos, contudo protocolos para utilização de pentoxifilina no sêmen bovino ainda são escassos necessitando de novos estudos para padronização da técnica.

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The in vitro embryo production (IVP) is a reproductive biotech used to spread the genetic characteristics of the female, being a tool that helps in the understanding of infertility cases, directly increasing the genetic potential of animals and herd productivity. The selection of bulls for fertilization of oocytes on the PIV is of great importance in guaranteeing acceptable yields of this technique, however, in most cases, semen used in PIV is cryopreserved and during the cryopreservation process can damage the sperm membrane , excessive production of oxidative stress (ROS), premature maturation and increase the proportion of capacitated spermatozoa acrosome-reacted and being associated with reduced motility, viability, membrane integrity and low post-thaw fertility. Some studies have been conducted to minimize these losses quality after cryopreservation and preserve fertilizing capacity of sperm cells to promote increased motility and assisting in oocyte fertilization. Pentoxifylline is an inhibitor of fosfodiesterese drug that has been used in assisted reproduction techniques for promoting increased motility and consequent higher fertilization rates. However, its use in breeding cattle has not been adequately studied. The objective of this study was to determine whether different concentrations of pentoxifylline (10 and 20mM) improve the characteristics of semen and therefore IVF bovine embryos. It used the semen four bulls tested for in vitro production, passed in discontinuous Percoll gradients (45 to 90%) and divided into treatment: Control with addition of 10 mM and 20 mM, and subsequently used for in vitro production and analysis motility, vigor mitochondrial activity, sperm capacitation and oxidative stress (ROS) of fertilization and cultivation methods. The experiment was conducted in randomized blocks and the media analyzed with 5% significance level. The motililidade force and sperm decreased with the addition of pentoxifylline (P <0.0001, P = 0.0002) as well as cleavage (P = 0.0173), blastocyst production (P = 0.0424) increase beyond spermatozoa with degenerative acrosome reaction (P = 0.0004), but no difference was observed in the production of reactive oxygen species or the mitochondrial cytochemistry activity (P> 0.005). It follows that the use of pentoxifylline in concentrations of 10 and 20 mm have been detrimental to spermatozoa as well as the in vitro production of bovine embryos, however protocols for use of pentoxifylline in bovine semen are scarce need for further studies of technical standardization.

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