Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando técnicas convencionais e separação imunomagnética

RESUMO

Esta tese trata de um estudo de detecção de C. jejuni em produtos cárneos de frango utilizando separação imunomagnética. Inicialmente foram realizadas análises comparativas com diferentes metodologias convencionais utilizadas usualmente para detecção de C. jejuni a fim de avaliar qual a mais eficaz. Foram utilizadas amostras de carne de frango contaminadas experimentalmente com uma população de C. jejuni conhecida e foi observado se as técnicas testadas eram capazes de detectar a presença deste micro-organismo. Posteriormente desenvolveu-se uma nova técnica de diagnóstico utilizando separação imunomagnética, a qual foi testada frente a amostras contaminadas artificial e naturalmente. Micropartículas magnéticas foram ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni, as quais foram utilizadas após a etapa de enriquecimento para ligarem-se às células de C. jejuni e, com uso de separador magnético, concentrá-las para posterior semeadura em ágar. Foi possível observar que, quando foram utilizados meios de pré-enriquecimento, houve melhora na detecção nos meios sólidos. A separação imunomagnética apresentou maior sensibilidade no isolamento de C. jejuni de amostras de carne de frango do que o método convencional. A técnica de separação imunomagnética pode ser usada para isolamento de C. jejuni de produtos de frango, oferecendo a vantagem de detectar o micro-organismo em amostras a partir das quais o isolamento não é obtido com o uso do método convencional.

ABSTRACT

This is a dissertation about the study of detection of C. jejuni in chicken products using immunomagnetic separation. In the beginning comparative analysis were carried out with different conventional methodologies often used for C. jejuni detection in order to asses which one was more effective. Contaminated chicken meat samples were experimentally used with a known C. jejuni population and it was observed if the techniques tested were capable of detecting the presence of this microorganism. Afterwards, it was developed a new diagnosis technique using immunomagnetic separation, which was tested if face to artificial and naturally contaminated samples. Magnetic microparticles were connected to anti-C. jejuni polyclonal antibodies, which were used after the stage of enrichment to connect to the cells of C. jejuni and, with the use of magnetic separator, concentrate them for later plating in agar. It was possible to observe that, when pre-enriched means were used, there was improvement in the detection of solid means. The immunomagnetic separation has presented bigger sensibility in the isolation of C. jejuni of samples of chicken food than the conventional method. The technique of immunomagnetic separation can be used for isolation of C. jejuni of chicken products, offering the advantages of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of conventional method.