Uso da lectina do quiabo (Abelmoschus esculentus) como marcador da célula espermática ovina

RESUMO

As lectinas estão sendo empregadas como marcadores de superfície na membrana plasmática de espermatozoides devido sua ligação ao sacarídeos das mesmas. O objetivo consiste em buscar a localização de ligação e a colaboração da lectina de quiado (Abelmoschus esculentus) nos espermatozoides de ovinos. A lectina de A. esculentus foi purificada como o descrito em Soares et al. (2012). Foram utilizados 8 ejaculados de carneiros. As amostras foram diluídas em diluente padrão tris-gema acrescida de diferentes concentrações de lectinas conforme o tratamento T1 0µg de lectina; T2 1µg de lectina; T3 3µg de lectina; T4 5µg de lectina. As amostras foram acondicionadas a 5°C. Para avaliações espermáticas nos períodos 0h, 2hs e 24hs elas eram aquecidas a 37°C. Para as análises de integridade de membrana, mitocôndria, fluidez e ROS, foi utilizada a citometria de fluxo. Para avaliação da cinética dos espermatozoides, foi utilizado o sistema Computer-Assisted Sperm Analysis (CASA). A marcação da lectina na célula espermática foi feita com FITC e observada através do Microscópio Confocal Invertido de Varredura a Laser e observamos que a fluorescência foi detectada na peça intermediária do espermatozoide. Em nenhum período de acondicionamento foi observada diferença em relação a integridade de membrana, mitocôndria e fluidez espermática. No período de 0 h na cinética espermática o deslocamento e a velocidade foram inferiores no T4 do que no T3 (P<0,05). Na avaliação de 2 hs o T2 foi superior aos demais tratamentos no deslocamento e velocidade espermática (P<0,05). Após acondicionamento por 24 h a 5ºC a cinética espermática foi superior no T3 em relação ao T4 não diferindo dos demais tratamentos. Este achado permite que a avaliação seminal possa ser realizada até 24 h sem perdas nas características seminais quando for adicionado com até 3µg de lectina a 5 ºC. Além de evidenciar que seu sítio de ligação é na peça intermediária de espermatozoides ovinos.

ABSTRACT

The lectins are employeds as surface markers in the plasma membrane of spermatozoa due to its binding to saccharides thereof. The aim is to seek the connection location and the collaboration of the lectin quiado (Abelmoschus esculentus) in sperm sheep. The lectin A. esculentus was purified as described in Smith et al. (2012). 8 ejaculates of ovines were used. The samples were diluted in Tris-egg yolk pattern plus diluent different concentrations of lectins according to treatment T1 -0g lectin; T2 1g lectin; T3 -3g lectin; T4 -5g lectin. The samples were stored at 5°C. For reviews on sperm periods 0h, 2h and 24 hours they were heated to 37°C. For the analysis of membrane integrity, mitochondria, fluidity and ROS, we used flow cytometry. To evaluate the kinetics of sperm cells, we used the Computer-Assisted Sperm Analysis system (CASA). The marking of the lectin in the sperm cell was made with FITC and observed by Confocal Microscope Inverted Scanning Laser and observed that the fluorescence was detected in the intermediate part of the spermatozoon. In no conditioning period difference was observed in relation to membrane integrity, mitochondria and sperm flow. At 0 hour period in sperm kinetic displacement and the speed they were lower T4 than in T3 (P <0.05). In the assessment of 2 hours T2 was higher than others in the displacement and sperm velocity (P <0.05). After conditioning for 24 h at 5°C sperm kinetics was higher in T3 compared to T4 not differing from the other treatments. This finding allows that seminal assessment can be made up to 24 hours without loss in the seminal characteristics when added up to 3g lectin to 5°C. In addition to evidence that its binding site is in the middle piece of sperm ovines.