Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-201827

Resumo

O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo descritivo sobre o perfil das células granulocíticas e monocíticas na mucosa intestinal de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum, na presença ou na ausência do parasita no intestino. Além disso, realizou-se um estudo de correlação entre a intensidade parasitária e os fatores clínicos do hospedeiro, as células envolvidas e as alterações histopatológicas da parede intestinal. Dos 39 cães avaliados, somente 20 foram utilizados no estudo, sendo, 17 positivos para leishmaniose visceral canina (LVC) e três negativos. Os animais com LVC foram eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Ilha Solteira, SP, Brasil, e os negativos vieram a óbito natural por motivos diversos. As técnicas de histoquímica e imunoistoquímica foram utilizadas para marcar as células estudadas, identificar as amastigotas de Leishmania e auxiliar nas análises histopatológicas do trato intestinal. Os cães foram divididos em três grupos (G1, G2 e G3). Oito cães positivos para LVC e com amastigotas de L. infantum no intestino foram selecionados para o grupo G1; nove cães positivos para LVC sem amastigotas intestinais para o grupo G2 e, três cães negativos compuseram o grupo controle (G3). Todos os animais não apresentaram coinfecção parasitária gastrintestinal, mediante exames coproparasitológicos realizados in vivo ou pos-morten. As variáveis clínicas dos animais, a intensidade parasitária e a presença das células mononucleares (linfócitos T CD4+, CD8+ e macrófagos) foram avaliadas por uma classificação semiquantitativa baseada em escores que variaram de 1 a 4. Já as células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) foram quantificadas na mucosa (unidade de vilo e cripta - UVC), submucosa e na muscular. Para as análises de comparação entre os grupos (G1, G2 e G3), o teste de KrusKal-Wallis foi empregado para avaliar as váriaveis clínicas, o teste t para células granulocíticas, e o teste de Duncan para comparar as células monocíticas. As análises de correlação foram baseadas no teste de Spearman (dados semiquantitativos) e no coeficiente de correlação linear de Pearson (dados quantitativos). Formas amastigotas de L. infantum foram detectadas em 40% dos animais (8/20) e estavam distribuídas na lâmina própria da mucosa (vilosidades e criptas), submucosa e na camada muscular do intestino delgado e na mucosa e submucosa do intestino grosso. A reação inflamatória mais destacada no grupo G1 foi caracterizada por infiltrado crônico de células mononucleares, principalmente macrófagos, linfócitos e plasmócitos. Embora os cães do grupo G1 estivessem mais clinicamente comprometidos, não diferiram estatisticamente do grupo G2 em todas as variáveis estudadas, principalmente ao nível da mucosa intestinal, mas apresentaram diferenças significativas em relação ao grupo (G3). Além disso, no grupo G1, houve correlação positiva e significativa entre a intensidade parasitária, as alterações estruturais microscópicas da mucosa e os sinais clínicos sistêmicos. De acordo com a análise das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos), foi observado um aumento significativo (p 0,05) nos animais do grupo G2, seguido pelos animais do grupo G1, em relação aos controles. Os polimorfonucleares (neutrófilos e eosinófilos) apresentaram-se em maior quantidade no intestino delgado do que no intestino grosso. Já os mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva entre si por todo o trato intestinal. As células T CD4+ foram pouco expressivas nos três grupos avaliados, não apresentando diferença significativa (p 0,05) entre eles. No entanto, ocorreu aumento significativo 18 de linfócitos T CD8+ e de macrófagos no grupo G1 em relação aos grupos G2 e G3, principalmente nos órgãos mais infectados por amastigotas de L. infantum, como o duodeno e o cólon. A intensidade parasitária por L. infantum no intestino grosso esteve correlacionada negativamente com as células T CD4+, e positivamente com os linfócitos T CD8+ e macrófagos. Em conclusão, os cães polissintomáticos para LVC do grupo G1 demonstraram alterações microscópicas na mucosa intestinal, marcada por processos inflamatórios associados com a proliferação de células mononucleares como macrófagos e linfócitos T CD8+. Já os cães polissintomáticos do grupo G2 apresentaram uma hiperplasia de células granulocíticas sugerindo uma possível infecção secundária por agentes não parasitários. Concluiu-se ainda que a doença LVC pelo seu caráter debilitante e imunossupressor pode comprometer a homeostasia intestinal, indireta ou diretamente pela presença de formas amastigotas de L. infantum correlacionadas com alguns sinais clínicos específicos da doença e com alterações patológicas na mucosa intestinal.

---

The aim of this study was a descriptive evaluation on the profile of granulocytic and monocytes cells in the intestines of dogs naturally infected by Leishmania infantum in the presence or absence of the parasite in the intestine. In addition, i t was performed a correlation study among parasite intensity, clinical factors of the host, the cells and the histopathological changes of the intestinal wall. 39 dogs were evaluated, but only 20 were used in the studies, 17 positive for canine visceral leishmaniasis (CVL) and three negative. The animals with CVL were euthanized in the Zoonosis Control Center (CCZ) of Ilha Solteira, SP, Brazil, and the negative animals had natural death for several reasons. The histochemical and immunohistochemical techniques were used to stain the cells and Leishmania amastigotes, and to proceed the histopathological analysis of the intestinal tract. The dogs were divided into three groups (G1, G2 and G3). Eight dogs positive for CVL and with amastigotes of L. infantum in the gut was selected to G1 group; nine CVL positive dogs without intestinal amastigotes were in G2 group and three negative dogs in the control group (G3). All animals showed no gastrointestinal parasite coinfection by coproparasitological examinations in vivo or post-mortem. Clinical variables of the animals, the parasite intensity, the presence of monocytic cells (CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages) were evaluated by a semiquantitative analysis based on scores ranging from 1 to 4. However, granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) was quantified in the mucosa (villus and crypt unit - UVC), submucosa and muscle. For comparison analysis between groups (G1, G2 and G3), the Kruskal-Wallis test was used to evaluate the clinical variables, the t test for granulocytic cells, and Duncan's test to compare the monocytic cells. Correlation analyzes were based on Spearman test (semiquantitative data) and linear correlation coefficient of Pearson (quantitative data). Amastigote forms of L. infantum were detected in 40% animals (8/20) and was distributed in the lamina propria of mucosa (villi and crypts), submucosal and muscular layers of the small intestine and in the mucosa and submucosa of the colon. The most prominent inflammatory reaction in group G1 was characterized by a chronic infiltration of mononuclear cells, mainly macrophages, lymphocytes and plasma cells. Dogs from G1 group were the most infected; however, there was not statistical difference from G2 group for all variables studied, particularly in the intestinal mucosa, but statistically differed in relation to the control group (G3). In the G1 group, there was a positive and significant correlation between parasite intensity, the microscopic structural changes in the mucosa, and systemic clinical signs. According to the analysis of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils and mast cells), a significant increase in numbers of cells was observed (p 0.05) in the G2 group, followed by the animals from G1, compared to control group (G3). There was not statistical difference (p 0.05) in numbers of CD4+ T lymphocytes among groups G1, G2 or G3. However, there was significant increase (p 0.05) of CD8+ T lymphocytes and macrophages in group G1 in relation to G2 and G3 groups, mainly in duodenum and colon, which were the most infected organs by L. infantum. The intensity of infection by L. infantum in the large intestine was negatively correlated with CD4+ T cells and positively with CD8+ T lymphocytes and macrophages. In conclusion, polysymptomatic dogs for CVL (G1) showed microscopic changes in the intestinal mucosa, marked by inflammation associated with the proliferation of mononuclear 20 cells such as macrophages and CD8+ T lymphocytes. The increase of granulocytic cells in dogs from G2 group, suggests a possible infection by other not parasitic agents present in the intestinal wall from these animals. Since the CVL is a debilitate and immunosuppressive disease it can change the intestinal homeostasy, indirect or directly by the presence of intestinal L. infantum amastigotes that was correlated with severe specific clinical signs of the disease and with intestinal mucosal pathological alterations.

Biblioteca responsável: BR68.1