Tumor Venéreo Transmissível Canino: Expressão de genes relacionados com o comportamento biológico e microambiente tumoral

RESUMO

O tumor venéreo transmissível (TVT) é um câncer transmissível, que propaga-se naturalmente entre os cães, pela transferência alogênica de células tumorais, principalmente, durante o coito. Sabe-se que o microambiente tumoral influencia diretamente no comportamento tumoral, além de interagir com o sistema imune do hospedeiro. Face aos escassos estudos relacionados aos eventos celulares envolvidos no microambiente tumoral, o presente estudo teve por objetivo quantificar a expressão de genes relacionados com esse microambiente, tanto em células do TVT in vivo como in vitro, correlacionando-o com a resposta clínica dos animais tratados com vincristina. Para tal, foram incluídos neste estudo 18 cães atendidos no Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, Campus de Botucatu, portadores de TVT de ocorrência natural. As amostras tumorais foram coletadas antes do tratamento quimioterápico, cultivadas e submetidas à análise citogenética e quantificação através de RT-qPCR. Observou-se amostras tumorais com reduzido número cromossomos (59) em relação ao cão (78) e o subtipo celular prevalente foi o plasmocitoide, embora células com padrão linfocitoide também tenham sido observadas. Quando comparamos as expressões gênicas, o gene TP53 se mostrou elevado na maioria dos casos, indicando possível alteração nesse gene, enquanto BCL-2, BCL-xL, BAX e RASSF1 apresentaram-se variáveis, dependendo do animal analisado, fato que pode ser devido a alterações genéticas e/ou epigenéticas no TVT, além da possibilidade de uma origem policlonal. Ademais, nessas situações, parece não ter ocorrido a regulação apoptótica esperada desses genes pelo TP53. No caso das citocinas IFN- e IL-6, em sua maioria verificou-se baixa expressão. Nesses casos, provavelmente não estava ocorrendo expressão de MHC nas células tumorais e nem ativação de células imunes a fim de eliminar o tumor. Os genes P21 e TGF- mostraram-se em sua maioria normais. Já VEGF exibiu expressões extremamente elevadas, evidenciando seu papel angiogênico para o crescimento tumoral, enquanto que CXCR4 se mostrou diminuído, possivelmente devido ao baixo potencial metastático que o TVT apresenta. Dessa forma, conclui-se que o microambiente tumoral, assim como o sistema imune do hospedeiro, possui influência no TVT, supostamente alterando a tumorigênese e a resposta clínica do animal relacionada ao tratamento.

ABSTRACT

The transmissible venereal tumour (TVT) is a transmissible cancer that is spread between dogs by the allogeneic transfer of living cancer cells during coitus. It is known that the tumor microenvironment influences directly into the tumor behavior, and interact with the host immune system. Few reports have been found about the cellular events involved in the tumour microenvironment and the aims of this study were to quantify the expression of the genes connected with the tumour microenvironment in vivo and in vitro (primary culture) TVT cells, correlating with the clinical response of the animals treated with vincristine. For this, 17 dogs from Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP, Botucatu, with naturally occurring TVT were included. Tumour samples were collected before chemotherapy, cultured and subjected to cytogenetic and RT-qPCR analysis. Tumour samples with fewer chromosomes (59) in comparasion to the dog (78) were observed and the TVT plasmacytoid cells predominated, although lymphocytic cells have also been found. The gene expression of P53 showed over expression in most cases, possibly indicating alteration of this gene, while BCL-2, BCL-xL, BAX and RASSF1 presented variables, depending on the analysed animal. This fact could be happening due the presence of genetic and/or epigenetic alterations, besides the possibility of a polyclonal origin. Moreover, in this situations, it seems to have not occurred the apoptotic regulation expected of these genes by TP53. In the case of the cytokines IFN- and IL-6 we mostly founded low expression. In these cases, probably was not ocorrung MHC expression in tumour cells, and no activation of immune cells to eliminate the tumour. The P21 and TGF- genes were normal in most samples. VEGF exhibited high expressions indicating its angiogenic role on the tumour growth , while CXCR4 were decreased, possibly because of the TVTs low metastatic potencial. Thus, we concluded that tumor microenvironment, as well as the host's immune system, influences the TVT, presumably altering its tumorigenesis and the clinical animals response related with treatment.