Caracterização da Enzima Conversora de Angiotensina no Sêmen de Touros Nelore

RESUMO

Esse estudo foi realizado com o objetivo de imunolocalizar a enzima conversora de angiotensina (ECA) no sêmen de touros Nelore, sua caracterização antes e depois da criopreservação do sêmen e sua importância na capacitação espermática. Utilizaram-se amostras de sêmen de cinco touros Nelore, sexualmente maduros, para a imunolocalização e padrão de localização. Para a caracterização antes e depois do congelamento/descongelamento, foram utilizadas amostras de 10 touros Nelore, sexualmente maduros. Após a coleta, a metade do ejaculado foi congelado e a outra metade foi processada in natura. Imediatamente após a coleta ou descongelamento, o sêmen foi centrifugado duas vezes e o pellet ressuspendido com TALP. As amostras foram padronizadas numa concentração de 100 x 106 espermatozoides em 100 L e submetidas ao western blot e à imunocitoquímica utilizando-se o anticorpo anti-ECA. O anticorpo monoclonal utilizado foi capaz de reconhecer pelo menos uma banda de proteínas com 100 kDa na suspensão de espermatozoides dos touros Nelore, bem como no plasma seminal destes mesmos animais. A imunodetecção da ECA no espermatozoide foi caraterizada pela coloração intensa observada sobre toda a região periacrosomal, demonstrando a localização desta enzima no espermatozoide dos animais avaliados. Após o descongelamento, percebeu-se que o processo de criopreservação reduziu a intensidade das bandas de proteínas em aproximadamente 70% da quantidade inicial (P<0,05), mostrando que houve perda desta enzima durante o protocolo utilizado. pela técnica de imunocitoquímica também observou-se uma redução na intensidade do corante fluorescente, entretanto, não houve alteração na localização da enzima. Houve redução da capacitação espermática e reação do acrossomo no grupo tratado com inibidor da ECA (captopril - 10M) (P<0,05), o que indica ação da enzima nesses processos.

ABSTRACT

This study was conducted to determinate the imunolocalization of the angiotensin converting enzyme (ACE) in the semen of Nelore bulls, its characterization before and after cryopreservation and its importance in sperm capacitation. Were used semen samples from five Nellore sexually mature bulls, for immunolocalization and pattern location, and for characterization before and after freeze / thawing, samples were used from 10 Nellore sexually mature bulls. After collection with artificial vagina, half of the ejaculate was frozen and half was processed in natura. Immediately after collection or thawing, the semen was centrifuged twice and resuspended pellet with TALP. Samples were standardized to a concentration of 100 x 106 sperm in 100 L and subjected to western blot and immunocytochemistry using anti-ACE antibody. The monoclonal antibody used was able to recognize a band of 100 kDa protein in spermatozoa suspension of Nellore as well as seminal plasma of these same animals. Immunodetection ACE in sperm was characterized by intense staining observed on all periacrosomal region, showing the location of this enzyme in sperm of animals worked. After thawing, it was noticed that the cryopreservation process reduced the intensity of the protein bands in over 70% of the initial quantity (P <0.05), showing that this enzyme was lost during the protocol used. The immunocytochemistry technique also showed a reduction in the intensity of fluorescent dye, however, there was no change in the enzyme's location. There was reduction in sperm capacitation and acrosome reaction in the group treated with ACE inhibitor (captopril - 10 mM) (P <0.05), indicating action of the enzyme in these processes.