Identificação e caracterização molecular das espécies de Plasmodium sp. em Spheniscus magellanicus (Sphenisciformes: Spheniscidae) resgatados no litoral do Rio de Janeiro.

RESUMO

A movimentação de patógenos entre aves domésticas e selvagens ainda permanece um tema repleto de incertezas. Isto pode representar um perigo em potencial não só para a avicultura comercial, mas para a conservação de espécies selvagens que não estejam adaptadas a estes patógenos. Ambientalistas tem mostrado que a população natural de pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus Foster 1781) vem diminuindo drasticamente, a ponto de tornar essas aves potencialmente ameaçadas. Sazonalmente os pinguins-deMagalhães migram em busca de alimento na plataforma continental brasileira e alguns indivíduos encalham em áreas costeiras nacionais. Debilitados, adquirem doenças que contribuem para o baixo sucesso na reabilitação, com destaque para a malária aviária. Embora recuperados clinicamente, estes animais podem se tornar reservatórios para a doença de modo que podem representar riscos de transmissão para outras aves. Para a malária aviária, a padronização de novas técnicas que enalteçam a real sensibilidade da biologia molecular se faz necessária. Assim, o objetivo do presente é detectar a ocorrência de Plasmodium sp., caracterizando, por técnicas moleculares, as espécies envolvidas e seus genótipos. Foram coletadas amostras de sangue de cento e sete pinguins-de-Magalhães em reabilitação na Clínica de Recuperação de Animais Silvestres em Vargem Pequena, RJ, as quais cinquenta foram encaminhadas para diagnóstico molecular e sequenciamento para a determinação das espécies de Plasmodium sp presentes. Foram sequenciadas dez amostras de Plasmodium; duas amostras foram identificadas como Plasmodium gallinaceum, sendo o primeiro registro de infecção por essa espécie de Plasmodium em pinguins-de-Magalhães (S. magellanicus), e uma amostra de uma linhagem semelhante à Plasmodium cathemerium, denominada PADOM09 pelo banco genético MalAvi. As demais amostras, ao serem agrupadas em uma árvore filogenética formaram dois grupos distintos com alta similaridade interna, que não formaram clade com sequências de Plasmodium previamente descritas na literatura. O S. magellanicus, em razão de sua susceptibilidade natural, demonstrou ser uma boa fonte de estudos para se determinar a fauna parasitária local. Por outro lado, diversos protocolos de PCR para a detecção de Plasmodium descritos na literatura não obtiveram amplificação em amostras conhecidamente positivas. No Brasil, apesar de haverem vários estudos em que o diagnóstico molecular de Plasmodium foi realizado, poucos utilizaram o sequenciamento dos parasitas encontrados, de modo que informações sobre a real diversidade de linhagens de Plasmodium aviário no país ainda são escassas.

ABSTRACT

The dissemination of pathogens between domestic and wild birds still remains a topic full of uncertainties. This may represent a potential danger not only for the commercial poultry industry, but for the conservation of wild species that are not adapted to these pathogens. Environmentalists have shown that the natural population of Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus Foster 1781) has decreased dramatically, to the point of making them potentially endangered birds. Every year the Magellanic penguins migrate along the Brazilian continental shelf in search of food, and occasionally some individuals wash ashore in national coastal areas. Debilitated, they usually acquire diseases that contribute to their low success in rehabilitation, especially avian malaria. Although clinically recovered, these animals can become reservoirs for the disease, which may de transmited and therefore could represent a risk for other birds. In case of avian malaria, standardization of new techniques that enhance the sensitivity of diagnostic tools such as molecular biology is required. Thus the objectice of the present study is to detect the presence of Plasmodium sp., characterizing, with molecular techniques, their genotypes and species involved. Blood samples of a hundred and seven Magellanic penguins (S. magellanicus) were collected from the recovering animals in the Clínica de Recuperação de Animais Silvestres in Vargem Pequena, RJ, of which fifty were used for molecular diagnostic and sequencing in order to determine the infecting Plasmodium sp. species. Ten samples were succefully sequenced as Plasmodium; two samples were identified as Plasmodium gallinaceum, which is the first record of this Plasmodium species infecting Magellanic penguins (S. magellanicus), and a single sample identified as a lineage genetically similar to Plasmodium cathemerium, designated PADOM09 by the genebank MalAvi. The remaining samples, when grouped in a phylogenetic tree formed two distinc clades with high internal similarity, and did not group with any of the known Plasmodium lineage samples deposited in genebanks. The S. magellanicus, by reason of their natural susceptibility to this parasite, has shown to be a good source for determining the local parasitic fauna. On the other hand, several PCR protocols for the detection of Plasmodium described in literature were not successful in amplifying its DNA in infected samples. In Brasil, despite the publication of several studies utilizing molecular techniques for detecting avian Plasmodium, few sequenced the parasites found. For this reason, data regarding the real diversity of Plasmodium lineages and species are still scarce.