SUPEROVULAÇÃO, COLHEITA E INOVULAÇÃO DE EMBRIÕES PELA TÉCNICA TRANSCERVICAL EM CABRAS DA RAÇA TOGGENBURG

RESUMO

O presente estudo teve por objetivo avaliar diferentes aspectos do processo de superovulação e transferência de embriões em caprinos da raça Toggenburg durante as estações de anestro e de acasalamento. O estudo foi dividido em três ensaios. Tanto no primeiro quanto no segundo ensaio, primeiramente foram avaliados dois protocolos de indução/sincronização do estro base durante ambos os períodos estacionais (anestro e acasalamento). As cabras (n=12) tiveram o estro induzido/sincronizado com duas doses de 37,5 g d-cloprostenol intervaladas de sete dias (GPGF2; n=6) ou através do uso de esponjas intravaginal contendo medroxiprogesterona (GP4; n=6) mantido por seis dias. Avaliações ultrassonograficas foram realizadas diariamente durante 10 dias para avaliação do número, diâmetro folicular e o dia da emergência de ondas foliculares para ambos os tratamentos. Para avaliação da dinâmica folicular ovariana das fêmeas durante os protocolos de indução/sincronização do estro base, foram realizadas análise de variância (ANOVA). O dia escolhido para início dos tratamentos superovulatórios durante a estação de anestro no GPGF2 foi 84 h após a aplicação da segunda dose de PGF2 e 48h antes da remoção do dispositivo intravaginal no GP4. Na estação de acasalamento no GPGF2 foi 72 h após a aplicação da segunda dose e 48 h após a inserção do dispositivo intravaginal. Na estação de anestro, no GPGF2 nos dias D8, D9 e D10 foram equivalentes (P>0,05), no grupo GP4 os dias D4, D5 e D6 foram iguais (P>0,05). Durante a estação de acasalamento, no GPGF2 os dias D8 e D9 foram iguais (P>0,05) e no GP4 os dias D1, D2 e D3 não diferiram (P>0,05). Com relação a manifestação do estro durante os protocolos de indução/ sincronização do estro base não foi verificado diferença entre os parâmetros avaliados independente do período estacional (P >0,05). Posteriormente, em ambos os períodos estacionais foram selecionadas 15 cabras para serem doadoras de embriões. Os animais foram equitativamente subdivididas em três tratamentos GPGF2, GP4 e GControle. Para tal, 10 fêmeas foram superovuladas duas vezes com intervalo de 60 dias em modelo cross-over. As cabras de GPGF2 (n=5) e GP4 (n=5) receberam o mesmo tratamento superovulatório, sendo estes iniciados na primeira onda de crescimento folicular baseado na indução/sincronização do estro base. O terceiro grupo (GControle n=5) teve apenas o estro induzido/sincronizado, com o uso de dispositivo intravaginal contendo progesterona. As doadoras foram superovuladas com doses 200 mg de pFSH por cabra, diluídas em 20 mL de solução salina e administradas (i.m.) seis doses decrescentes intervaladas de 12 h. As doadoras em estro foram acasaladas com bodes. Todas as colheitas foram efetuadas por via transcervical entre o sexto e sétimo dia após o início do estro. Para avaliação dos dados referentes ao comportamento sexual, das respostas as tratamento superovulatório e das dosagens hormonais doadoras durante ambos os períodos estacionais foram realizadas análise de variância (ANOVA). Com relação aos dados do comportamento sexual não foi observado diferença (P>0,05) nos grupos experimentais nem nos períodos estacionais. Entretanto, com relação à resposta ao tratamento superovulatório, o número de CLs diferiu (P<0,05) sendo GPGF2 e GP4 maior que o GControle em ambos períodos estacionais. Durante a estação de anestro o número de estruturas totais recuperadas diferiu (P<0,05) sendo o GP4 maior que GPGF2 e GControle, entretanto 18 não foi observado diferença nestes parâmetros na estação de acasalamento. O número de embriões e de estruturas degeneradas não diferiu (P>0,05) entre os grupos experimentais nem entre os períodos estacionais. O número de estruturas não fertilizadas durante na estação de anestro diferiu (P<0,05), sendo o GP4 maior que os demais que foram equivalentes (P>0,05), já na estação de acasalamento não foi visualizado diferença (P>0,05). A concentração plasmática de P4 não diferiu entre os tratamentos independente do período estacional (P>0,05). Porém a concentração plasmática de E2 diferiram (P<0,05) entre os dias de avaliação. No terceiro ensaio, os 36 embriões viáveis (25 mórulas e 11 blastocistos) colhidos durante ambas as estação foram transferidos a fresco por via transcervical para 28 receptoras. As receptoras tiveram o estro sincronizado através de esponjas vaginais impregnadas com análogo de progesterona, no dia da colocação da esponja vaginal foi administrado 37,5 g d-cloprostenol 24 h antes da remoção da esponja, foi administrado 200 UI eCG e 37,5 g d-cloprostenol. Após a retirada foram realizadas duas rufiações diárias para a identificação do início e final do estro. Todos os animais foram avaliados por ultrassonografia transretal um dia antes da inovulação para identificação dos CLs. Para avaliação dos dados referentes as inovulações embrionárias foram feito modelos de regressão logística uni e multivariados. Todos os animais sincronizados manifestaram estro. Dos embriões transferidos (mórula ou blastocisto) houve diferença com relação a taxa de gestação, sendo 16,0% (4/25 mórula) e 45,5% (5/11 - blastocisto) (P<0,05). Outro parâmetro onde verificou-se diferença foi com relação ao grau de classificação dos embriões (I,II e III), sendo o grau I 55,6%a grau II 23,1%ab e grau III 7,1%b (P<0,05). Porém, com relação ao corno inovulado ao número de CLs ao número de embriões transferidos por receptora e ao tratamento que as doadora foram submetidas não diferiu (P>0,05). Contudo a taxa de gestação foi de 32,14% (9/28) e a de parição de 38,88% (14/36).

ABSTRACT

This study aimed to evaluate different aspects of the process of superovulation and embryo transfer in Toggenburg breed goats during the seasons of anestrous and mating. The study was divided into three tests. Either the first or the second test, it was first performed two protocols induction / synchronization of oestrus base during both seasonal periods (anestrous station and mating season). The goats (n = 12) were induced / estrus synchronized with two doses of 37.5 g d-cloprostenol spaced seven days (GPGF2; n = 6) or through the use of intravaginal sponges containing medroxyprogesterone (GP4, n = 6 ) held for six days. Reviews ultrasound was performed daily for 10 days for assessment of the number, follicular diameter, and the day of the follicular wave emergence for both treatments. For evaluation of ovarian follicular dynamics of females during the induction protocols / base estrus synchronization were performed analysis of variance (ANOVA). The day chosen for the beginning of the super-ovulatory treatments during anoestrus was GPGF2 station at 84 h after the second dose of PGF2a and 48h before removal of the intravaginal device in GP4. At the mating station in GPGF2 it was 72 hours after the second dose and 48 h after the insertion of the intravaginal device. In anestrous station in GPGF2 days in D8, D9 and D10 were similar (P> 0.05) in the group GP4 day D4, D5 and D6 were similar (P> 0.05). During the mating season, the GPGF2 the D8 and D9 days were similar (P> 0.05) and GP4 day D1, D2 and D3 did not differ (P> 0.05). With respect to oestrus manifestation during the induction protocols / synchronization of oestrus base was not verified difference between the parameters evaluated independent of the seasonal period (P> 0.05). Subsequently, in both seasonal periods have been selected to be 15 goat embryo donors. The animals were equally divided into three GPGF2 treatments, GP4 and Gcontrol. We selected 10 females were superovulated twice 60 days apart in model "cross-over". Goats of GPGF2 (n = 5) and GP4 (n = 5) received the same superovulation, which are started in the first wave of follicular growth based on induction / synchronization of oestrus base. The third group (Control - n = 5) had only induced / estrus synchronized with the use of a progesterone intravaginal device. The donors were superovulated with 200 mg doses pFSH goat, diluted in 20 ml saline solution and administered (im) six decreasing doses spaced 12 h. Females in estrus were mated with male goats. All samples were collected via transcervical between the sixth and seventh day after the onset of estrus. To evaluate the data on the sexual behavior, the responses superovulatory treatment and donor hormone levels during both the seasons were carried out analysis of variance (ANOVA). Regarding sexual behavior data was not observed difference (P> 0.05) in the experimental group or the seasonal period. However, with regard to super-ovulatory response to treatment, the number of CLs differ (P <0.05) GPGF2 and GP4 being greater than Gcontrol in both seasonal periods. During anestrus station the total number of recovered structures differ (P <0.05) being greater than GPGF2 GP4 and Gcontrol, however no difference was observed in these parameters in the mating season. The number of embryos and degenerate structures did not differ (P> 0.05) between the experimental groups nor between the seasons. The number of unfertilized structures during the anestrus season differed (P <0.05), and the GP4 greater than the others that were similar (P> 0.05), as the breeding season was 20 not displayed difference (P> 0.05). The plasma concentration of P4 did not differ between treatments regardless of the seasonal period (P> 0.05). The E2 plasma concentration differ (P <0.05) between the time intervals. In the third trial, the 36 viable embryos (25 morulae and 11 blastocysts) collected during both seasons were transferred to fresh transcervical to 28 recipients. The receptor had estrus synchronized via vaginal sponges impregnated with progesterone analogue, on placing the vaginal sponge was administered 37.5 ug D-cloprostenol 24 h before removal of the sponge was administered 200 IU eCG and 37.5 ug d-cloprostenol. After the withdrawal were two daily rufiações to identify the beginning and end of estrus. All animals were evaluated by transrectal ultrasonography one day prior to embryo transfer identification of CLs. To evaluate the data embryonic inovulations were made logistic regression models univariate and multivariate. All animals showed synchronized estrus. Of transferred embryos (morula or blastocyst) were no differences with respect to pregnancy rate, with 16.0% (4/25 - morula) and 45.5% (5/11 - blastocyst) (P <0.05). Another parameter which is difference was found with regard to the degree of classification of embryos (I, II and III), and 55.6%a grade I grade II to grade III and 23.1%ab 7.1%b (P <0 , 05). However, with respect to the horn inovulado the number of CLs the number of embryos transferred by receiving and processing the donor were subjected did not differ (P> 0.05). However, the pregnancy rate was 32.14% (9/28) and the calving of 38.88% (14/36).