RELAÇÃO ENTRE A EXPRESSÃO DE GENES DE IMUNIDADE INATA E GRAU DE SOBREVIVÊNCIA INTRACELULAR DE Leishmania infantum EM MACRÓFAGOS CANINOS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS

RESUMO

A leishmaniose visceral canina é uma importante zoonose causada pelo protozoário Leishmania infantum, transmitida pela picada de insetos flebotomíneos. Apesar do avanço no conhecimento dos mecanismos imunológicos frente à infecção por Leishmania nos últimos anos, há poucos estudos sobre o estabelecimento da resposta imune em cães, especialmente sobre os mecanismos de imunidade inata. Nesse contexto, visando medidas futuras de controle dos casos caninos e humanos, a imunoterapia desponta como uma opção viável. Desta forma, o objetivo desse trabalho foi determinar o perfil de expressão gênica dos receptores TLR9, NOD1 e NOD2 e avaliar sua correlação com a sobrevivência intracelular de L. infantum em macrófagos caninos. Após exames de triagem e confirmação de diagnóstico negativo para a doença, foram selecionados 43 animais clinicamente saudáveis para coleta de sangue para cultivo celular. Após diferenciação de monócitos em macrófagos, parte do sobrenadante da cultura foi coletado e armazenado a -80ºC para posterior extração de RNA e realização de PCR em tempo real, para avaliação da expressão dos genes de imunidade inata. A outra parte foi experimentalmente infectada por L. infantum, com posterior avaliação da sobrevivência intracelular do parasito. Observou-se que a expressão desses genes é baixa, além de correlação positiva entre a expressão de NOD2 e a sobrevivência intracelular de L. infantum. Esses resultados evidenciam a importância de estudos que visem descrever, de forma mais aprofundada, a função destes e de outros receptores, tanto na infecção experimental como em animais naturalmente infectados.

ABSTRACT

Canine visceral leishmaniasis is an important zoonosis caused by Leishmania infantum, transmitted by sand flies. Despite the advance in the understanding of the immune mechanisms against Leishmania infection in recent years, there are few studies about the establishment of the immune response in dogs, especially on the mechanisms of innate immunity. In this context, aiming future control measures of canine and human cases, immunotherapy has emerged as a viable option. This way, the aim of this study was to determine the gene expression of the receptors TLR9, NOD1 and NOD2 in canine macrophages and evaluate their correlation with the intracellular survival of L. infantum. After screening tests and confirmation of negative diagnosis for the disease, 43 clinically healthy animals were selected for blood collection for cell culture. After monocytes differentiation into macrophages, part of the culture supernatant was collected and stored at -80°C for subsequent RNA extraction and real-time PCR, for evaluation of the expression of innate immunity genes. The other part was experimentally infected with L. infantum, with further evaluation of the intracellular survival of the parasite. It was observed the low expression of these receptors and a positive correlation between the expression of NOD2 and intracellular survival of L. infantum. These results highlight the importance of studies that aim to describe, in a more detailed manner, the function of these and other receptors, both in experimental infection as in naturally infected animals.