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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203115

Resumo

As ostras do gênero Crassostrea dão origem a um alimento rico em nutrientes que são importantes para o desempenho de diversas funções no organismo humano. Os moluscos bivalves se desenvolvem no ambiente natural de forma sustentável, pois se alimentam de partículas em suspensão devido a um eficiente sistema de filtração e fixação de nutrientes. Os bivalves são considerados bioindicadores da qualidade do ambiente aquático onde vivem, uma vez que acumulam diversas bactérias, incluindo importantes patógenos que podem ser provenientes de contaminação ou da microbiota indígena estuarina ou marinha. Enquanto alimento e, sendo consumidos preferencialmente crus, permitem a veiculação de bactérias patogênicas. A ocupação desordenada das regiões estuarinas provoca intensa contaminação dos manguezais por efluentes domiciliares que pode ser estimada através da análise de bivalves extraídos destas regiões. Na presente pesquisa, foram determinados os Números Mais Prováveis (NMP) de coliformes totais, Escherichia coli e Enterococcus spp.; identificadas algumas espécies dos gêneros Enterococcus e Vibrio e foi verificado o perfil de susceptibilidade a agentes antimicrobianos de espécimes do gênero Enterococcus isoladas a partir de ostras oriundas do manguezal de Barra de Guaratiba, Rio de Janeiro. A determinação do NMP de coliformes totais, de E. coli e de Enterococcus spp. foi realizada empregando-se métodos cromogênicos rápidos. O isolamento de Enterococcus spp. foi realizado em Ágar m-enterococos a partir do crescimento nos tubos do meio cromogênico. A identificação presuntiva do gênero Enterococcus foi realizada por provas bioquímicas tradicionais. Para o isolamento e identificação presuntiva do gênero Vibrio, foi utilizada a metodologia descrita pela APHA (2001). A fim de se identificar as espécies, as cepas triadas foram analisadas pela técnica da ionização por dessorção a laser assistida por matriz e detecção de tempo de vôo com análise por espectrometria de massas (do inglês MALDI-TOF-MS). Para determinação da susceptibilidade das bactérias do gênero Enterococcus aos antimicrobianos, empregou-se a metodologia indicada pelo CLSI (2014). Pela técnica de MALDI-TOF-MS, identificou-se 75,7% das bactérias presuntivamente pertencentes ao gênero Enterococcus em nível de espécie e 21,2% em nível de gênero, mas só foram identificadas 13,5% das cepas de vibrios em nível de espécie e 70,3% em nível de gênero. Foram isoladas duas cepas de E. faecalis resistentes a três diferentes classes de antimicrobianos, incluindo resistência a altas doses de estreptomicina. Também foi isolada uma cepa de E. faecalis com resistência intermediária à vancomicina. Conforme a legislação brasileira do extinto Ministério da Pesca e Aquicultura (BRASIL, 2013), os valores encontrados para os NMP de E. coli foram indicativos da necessidade de processamento do molusco antes de sua comercialização ou seu consumo. Além da concentração de E. coli, a presença de cepas resistentes a múltiplos agentes antimicrobianos e à vancomicina é considerada um risco para o consumo in natura das ostras extraídas no manguezal de Barra de Guaratiba. Também reflete a contaminação da água e, possivelmente, de outras espécies de pescado, o que representa uma ameaça para aquele ambiente e para a saúde pública dos residentes e consumidores de pescado provenientes daquela região.

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The Crassostrea spp. oysters are rich in essential nutrients for human body. In the natural environment, bivalve mollusks grow in a sustainable way since they are filter feeders and remove plankton and suspended particles from the water column using their efficient filtering system and nutrients fixation capacity. This process leads to very few residues that are expelled and used by other organisms present in the same environment. Bivalve mollusks are considered bioindicators of the environment quality because they accumulate different bacteria, including important pathogens coming from either fecal pollution or indigenous microbiota of estuarine or marine environment. As a human food, oysters are preferably consumed raw, allowing foodborne disease to occur. The unruled urban occupation of estuarine areas causes considerable contamination of mangrove by raw sewage. This contamination level can be estimated through the analysys of bivalve mollusks extracted from these areas. In the present study, Most Probable Number (MPN) of Total Coliforms, Escherichia coli and Enterococcus spp. was estimated; Enterococcus and Vibrio species were identified and the Enterococcus spp. antimicrobial susceptibility profile was evaluated for isolates obtained from Barra de Guaratiba Mangrove (Rio de Janeiro, Brazil) oysters. MPN was estimated through rapid chromogenic methods. Enterococcus spp. was isolated in m-Enterococcus agar after growth in chromogenic media. The presumptive identification of Enterococcus spp. used classical microbiological phenotypic characterization methods. The isolation and presumptive identification of Vibrio spp. were based on APHA (2001) methodology. For species identification, selected strains were analysed through matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). For the Enterococcus spp. antimicrobial susceptibility profile determination it was used the CLSI (2014) methodology. Through MALDI TOF MS, it was possible to identify the species of 75.7% of the isolates presumed to be Enterococcus spp. Another group of 21.2% of the isolates was confirmmed to be Enterococcus spp. (without positive identification of species). For presumed Vibrio spp. strains, MALDI TOF MS was able to confirm the species of 13.5% of the isolates and to confirm the genus of 70.3% of the isolates. Two E. faecalis strains were resistant to three different antimicrobial categories, including high-level resistance to streptomycin. One E. faecium strain showed intermediate resistance to vancomycin. According to the Brazilian legislation from the now extint Ministry of Fishery and Aquiculture (BRASIL, 2013), the MPN calculated for E. coli in the present study indicates the need for some oysters processing before either trade or consumption. Besides the E. coli concentration, the presence of strains that are resistant to multiple antimicrobial drugs and to vancomycin is another risk fator for the in natura (raw) consumption of the oysters from the Barra de Guaratiba Mangrove. It is also an indication for water and other fish species contamination, what represents a threat for that environment and for public health of both local residents and fish consumers.

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