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Interações entre os níveis de NO, ROS e atividade HO-1 com apoptose de células mononucleares de sangue periférico e leucócitos de baço de cães com leishmaniose visceral

ALINE APARECIDA CORREA LEAL.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203224

Resumo

Leishmania são protozoários intracelulares obrigatórios que infectam células fagocitárias de mamíferos ocasionando a leishmaniose visceral canina (LVC). Por apresentarem um intenso parasitismo cutâneo, os cães infectados possuem papel chave na transmissão da doença. Para sobreviver no hospedeiro, as leishmanias são capazes de desenvolver mecanismos de escape por alterações das respostas de células fagocitárias, tais como o NO e o ROS responsáveis pela morte intracelular do parasita. A HO-1 também pode estar envolvida na regulação da resposta imune, porém seu papel na leishmaniose visceral canina ainda não está claro. A produção excessiva de NO, ROS e HO-1 pode ser prejudicial e estar relacionada com a apoptose e desregulação imunológica na LVC. Assim o este estudo teve a finalidade de investigar os níveis de ROS, NO e atividade HO-1 em células mononucleares do sangue periférico e leucócitos do baço e sua correlação com a apoptose celular. Para isso foram utilizadas células mononucleares sanguíneas e leucócitos de baço de cães infectados e saudáveis. As células foram isoladas e cultivadas durante 24 horas , na sequencia foram incubadas com sondas para NO ou ROS e foi determinada a apoptose celular. Todos as análises foram realizadas por citômetria de fluxo. Após a lise das células em cultura, a atividade HO-1 foi determinada no lisado celular por método colorimétrico. O metabolismo oxidativo estava reduzido e a taxa de apoptose dos mononucleares sanguíneos aumentada, por influência do ROS. Os níveis de ROS e NO estavam diminuídos nos leucócitos do baço de cães infectados,e maior taxa de apoptose celular foi observada nos leucócitos de baço de cães infectados. A atividade da HO-1 obtida estava reduzida tanto nos monucleares do sangue como nos leucócitos do baço dos animais infectados, quando comparados aos animais saudáveis, porém não mostrou correlação com a apoptose. Concluímos que os mecanismos indutores de apoptose diferem nos sítios de infecção, ou seja, no baço os reativos de oxigênio e de nitrogênio estão envolvidos com a inibição do processo de morte celular, no entanto a atividade de hemooxigenase pode ter influência na apoptose.
Leishmania are obligate intracellular protozoan that infects phagocytic mammalian cells causing canine visceral leishmaniasis (CVL). Because they have an intense cutaneous parasitism, infected dogs have key role in disease transmission. To survive in the host, the Leishmania are able to develop escape mechanisms by changes in phagocytic cell responses, such as the NO and the ROS responsible for the death of intracellular parasites. The HO-1 may also be involved in regulating the immune response, but their role in canine visceral leishmaniasis is not yet clear. The excessive production of NO, ROS and HO-1 can be detrimental and to be related to immune dysregulation and apoptosis in LVC. So this study aimed to investigate the levels of ROS, NO and HO-1 activity in mononuclear cells of peripheral blood leukocytes and spleen and its correlation with cell apoptosis. For this they used blood mononuclear cells and spleen leukocytes from infected and healthy dogs. Cells were isolated and cultured for 24 hours following probes were incubated with NO or ROS and cell apoptosis was determined. All analyzes were performed by flow cytometry. After lysis of the cells in culture, HO-1 activity in cell lysate was determined by a colorimetric method. Oxidative metabolism was reduced and the apoptosis rate of increased blood mononuclear, influenced by ROS. The levels of ROS and NO were decreased in leukocytes from the spleen of infected dogs, and increased apoptotic rate was observed in spleen leukocytes from infected dogs. The activity of HO-1 was obtained in both reduced blood monucleares as in the splenic leukocytes from infected animals compared with healthy animals, but was not correlated with apoptosis. We concluded that the apoptosis-inducing mechanisms differ at sites of infection, or spleen reactive oxygen and nitrogen are involved with the inhibition of cell death, however hemooxigenase activity may play a role in apoptosis.
Biblioteca responsável: BR68.1