Avaliação e aplicação de uma PCR multiplex para detecção de fraude por adição de carne bubalina em carne moída bovina.

RESUMO

O presente trabalho buscou avaliar a sensibilidade de uma PCR multiplex para detecção de fraude por adição intencional de carne moída bubalina em carne moída bovina e sua aplicação em amostras comercialmente disponíveis nos municípios de Belém e Santarém, estado do Pará e Macapá, estado do Amapá. Para tal, carnes moídas de bovinos contendo 0,01%, 0,1%, 1%, 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%, 99,9%, 99,99% de carne moída bubalina foram produzidas em triplicata com cinco réplicas, bem como carnes moídas exclusivamente de cada uma das espécies foram utilizadas como controle e Reação em Cadeia da Polimerase multiplex foi realizada, para cada tratamento. A fim de auxiliar a análise da sensibilidade do teste, percentagens conhecidas de DNA (0,01%, 0,1%, 1%, 5%,10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%, 99,9%, 99,99%) das espécies Bos taurus e Bubalus bubalis foram diluídas e misturadas em um volume final de 10 L e também foram testadas pela metodologia proposta. Adicionalmente, testou-se a hipótese da existência de fraudes pela venda indevida de carne moída bubalina em adição e/ou substituição à carne moída bovina em 91 amostras de carne moída comercializadas como sendo de origem bovina, em diferentes estabelecimentos na região norte do Brasil e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplex proposta foi realizada. Os resultados demonstraram que a PCR multiplex proposta mostrou-se eficaz para a detecção simultânea de DNA de bovinos e bubalinos, com um limiar de 2,05ng de DNA bubalino e 0,41ng de DNA bovino, sendo capaz de identificar incrementos de 10% a 100% de carne bubalina em carnes moídas bovinas e incrementos de 0,1% a 100% de carne bovina em carnes moídas bubalinas, e demonstraram também que 17,5% das amostras coletadas continham carne bubalina. Concluiu-se que a PCR multiplex é uma de elevada precisão, capaz de detectar fraude por adição de carne bubalina em carne moída bovina.

ABSTRACT

This study evaluated the sensitivity of a multiplex PCR for deliberate addition to fraud detection in bovine buffalo ground beef ground beef and your application in commercially available samples in the cities of Belém and Santarém, Pará state and Macapá, Amapá state. To this end, ground beef meat containing 0.01%, 0.1%, 1%, 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%, 99.9%, 99.99% ground meat buffalo were made in triplicates with five replicates as well as ground meat exclusively from each species were used as control and Reaction Polymerase Chain multiplex was conducted for each treatment. To assist the analysis of the sensitivity of the assay, known percentages of DNA (0.01%, 0.1%, 1%, 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%, 99.9%, 99.99%) of the species Bos taurus and Bubalus bubalis were diluted and mixed in a final volume of 10 uL and were also tested by the proposed method. In addition, we tested the hypothesis of fraud for the improper sale of ground beef buffalo in addition and / or replacement to bovine ground beef in 91 samples of ground beef marketed as being of bovine origin, in different establishments in northern Brazil and Polymerase Chain Reaction (PCR) was carried multiplex proposed. The results showed that multiplex PCR proposal proved to be effective for the simultaneous detection of DNA cattle and buffalo, with a threshold 2.05ng of DNA and buffalo 0.41ng bovine DNA, being able to identify increments of 10% to 100% buffalo meat beef ground meat and increments of 0.1% to 100% beef in ground buffalo meat, and also showed that 17.5% of the samples contained buffalo meat. It was concluded that the multiplex PCR is a high precision, able to detect fraud by adding buffalo meat beef ground beef.