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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203851

Resumo

A anaplasmose bovina, causada pela rickettsia intraeritrocítica Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), é uma doença economicamente importante de bovinos que é endêmica em regiões tropicais e subtropicais do mundo. As Proteínas Principais de Superfície (MSPs) têm sido muito utilizadas em estudos envolvendo a rickettsia A. marginale, sendo MSP1a uma das mais estudadas, pois esta é uma adesina de eritrócitos bovinos e células de carrapato, possuindo assim um papel importante no fenótipo de transmissão do agente. Ao mesmo tempo, é considerada um marcador estável para cepas de A. marginale, uma vez que possui uma região C-terminal altamente conservada e uma região N- terminal, altamente variável, porém, constante para cepas. Acredita-se que esta proteína pode sofrer pressão seletiva pois possui um epítopo sensível à neutralização em sua região variável. Assim, em alterações casuais da estrutura das sequências repetidas devido à mutação, cepas bem adaptadas poderiam prevalecer no ambiente. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade do gene msp1 de A. marginale na infecção aguda e crônica em um bezerro imunocompetente experimentalmente infectado e em carrapatos. No estudo, foi utilizado um bezerro, que foi infectado experimentalmente com a cepa AmRio 1 de A. marginale por via endovenosa. Este bezerro foi acompanhado através da observação de sinais clínicos, temperatura retal, esfregaços sanguíneos e hematócrito do dia 2 após infecção experimental até o dia 28 após infecção. O bovino posteriormente foi infestado com 1g de larvas de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O sangue do bezerro foi colhido do dia 2 ao dia 28 pós infecção. Os carrapatos foram recuperados na fase de partenógina e foram submetidos à dissecção para remoção de intestino e glândula salivar, e também foi colhida saliva de uma parte destes carrapatos. As amostras foram submetidas a PCR, possuindo como gene alvo msp1 . O produto desta reação foi enviado para sequenciamento em ambas as direções. Após a inoculação da cepa AmRio 1 de A. marginale, o bovino apresentou sinais clínicos e alterações em hematócrito e temperatura, havendo necessidade de tratamento de suporte para a recuperação do animal. Isto demonstra a patogenicidade da cepa. Todas as amostras do bezerro e dos carrapatos foram positivas na PCR. As sequências revelaram uma estabilidade nas sequências repetidas de MSP1a, tanto na infecção aguda quanto na crônica no bezerro e em todos os órgãos e salivas de carrapato. A positividade das salivas de carrapato indica que a cepa AmRio 1 de A. marginale é transmitida biologicamente por R. (Boophilus) microplus. Além disto, nos órgãos de carrapato haviam grandes quantidades de DNA de A. marginale, indicando a replicação do agente nos órgãos de R. (Boophilus) microplus.

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Bovine anaplasmosis, caused by intraerythrocytic rickettsia Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), is an economically important disease of cattle which is endemic in tropical and subtropical regions of the world. Major surface proteins (MSP) have been widely used in studies involving A. marginale rickettsia, being MSP1a one of the most studied because it is an adhesin for bovine erythrocytes and tick cells, thus having an important role in the transmission phenotype agent. At the same time, it is regarded as a stable marker for strains of A. marginale, since it has a highly conserved C-terminal region and a highly variable N-terminal region, but constant for strains. It is believed that this protein can undergo selective pressure because it has a neutralization-sensitive epitope in its variable region. Therefore, in random changes in the structure of tandem repeats due to mutation, well adapted strains could prevail in the environment. Thus, the aim of this study was to evaluate the diversity of msp1 gene of A. marginale in acute and chronic infection in one experimentally infected immunocompetent calf and in ticks. In the study, a calf, which was experimentally infected intravenously with AmRio 1 strain of A. marginale, was used. This calf was monitored by observing clinical signs, rectal temperature, blood smears and hematocrit of day-2 after experimental infection until the day 28 after infection. The bovine was subsequently infested with 1g of Rhipicephalus (Boophilus) microplus larvae. The calf's blood was collected from day 2 to day 28 after infection. Ticks were recovered parthenogenetic phase and underwent dissection of the intestines and salivary glands, and also saliva was collected from a number of these ticks. The samples were subjected to PCR, with msp1 as target gene. The product of this reaction was sent to sequencing in both directions. After inoculation of the strain AmRio 1 of A. marginale, the calf expressed clinical signs and changes in hematocrit and temperature, needing supportive treatment necessary for its recovery. This demonstrates the pathogenicity of the strain. All samples from the calf and ticks were positive in PCR. The sequences revealed a stability in tandem repeats of MSP1a, both in acute and chronic infection in the calf, and in all of the ticks' organs and saliva. The positivity of tick salivae indicates that the strain AmRio 1 A. marginale is biologically transmitted by R. (B.) microplus. In addition, ticks' organs had large quantities of DNA of A. marginale, indicating the agent's replication in organs of R. (B.) microplus.

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