Avaliação Lectino-histoquímica de Fígado e Linfonodo Mesentérico de Búfalos Mantidos em Pastagens de Brachiaria spp.

RESUMO

MIRANDA, Ileana Costa. Avaliação lectino-histoquímica de fígado e linfonodo mesentérico de búfalos mantidos em pastagens de Brachiaria spp. 73 p. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Animais que se alimentam em pastos de Brachiaria spp. comumente apresentam macrófagos espumosos isolados ou agrupados no fígado, além de cristais no interior de ductos biliares, mas a patogênese da formação e o tipo de material armazenado nestas células ainda é desconhecida. A avaliação lectino-histoquímica pode auxiliar na detecção dos resíduos de carboidratos específicos, e saponinas esteroidais (metabólitos glicosilados secundários) têm sido identificadas nos cristais e no interior das células espumosas, que provavelmente são responsáveis por danificar o fígado e levar ao acúmulo de filoeritrina. Através deste trabalho, objetivou-se desenvolver e padronizar a utilização da lectino-histoquímica na detecção de metabólitos glicosilados nos tecidos de búfalos mantidos em diferentes pastos de Brachiaria spp no Brasil. Fragmentos de fígado e linfonodo mesentérico de 40 animais foram analisados 10 búfalos mantidos em pastagem predominante de B. decumbens por aproximadamente 12 meses; 10 búfalos mantidos em pastagem predominante de B. brizantha por aproximadamente 18 meses; 10 búfalos mantidos em pastagem de B. brizantha por aproximadamente quatro anos; e como controle negativo, 10 búfalos mantidos em pastagem livre de Brachiaria spp desde o nascimento. Quatorze lectinas foram testadas (Con-A, SBA, WGA, DBA, UEA, RCA, PNA, GSL-I, PSA, LCA, PHA-E, PHA-L, SJA e SWGA), em um total de 1120 fragmentos avaliados. Estudos anteriores demonstraram que a lectina PNA possui marcada reatividade para macrófagos espumosos de bovinos e ovinos. No presente estudo, a lectina SWGA apresentou acentuada reatividade e alta especificidade para macrófagos espumosos; WGA, GSL, PHA-E e PHA-L mostraram moderada a acentuada reatividade, mas baixa especificidade aos macrófagos espumosos; as outras lectinas não apresentaram reatividade ou especificidade significativas. Ainda não se sabe exatamente a que atribuir a diferença de reatividade aos macrófagos espumosos, mas sugere-se que divergências ocorram em função da espécie de Brachiaria ingerida, da idade da planta, ou de acordo com o tipo e a proporção dos glicoconjugados armazenados nas plantas em decorrência da época do ano. Além disso, sugere-se que diferenças de reatividade também possam ocorrer devido às diferenças no metabolismo da espécie do animal em questão, da presença ou não de fotossensibilização, da evolução clínica e do tempo de ingestão dos glicoconjugados. Adicionalmente, não houve diferença de marcação entre os fragmentos coletados de animais que se alimentaram de B. decumbens por 12 meses e B. brizantha por 18 meses, e a diminuição da presença e marcação lectino-histoquímica dos macrófagos espumosos nos tecidos dos búfalos que ingeriram B. brizantha durante mais tempo indica que os animais podem passar por um processo de adaptação de acordo com o tempo de ingestão da planta. A avaliação lectino-histoquímica pode ser utilizada para caracterizar o material armazenado em macrófagos espumosos presentes no fígado e linfonodo mesentérico de búfalos que se alimentam em pastagens de Brachiaria spp e ajuda na compreensão da patogênese de formação destas células. A análise lectino-histoquímica de animais que se alimentam de Brachiaria spp precisa de estudos aprofundados em conjunto com outros testes bioquímicos e histoquímicos para caracterizar completamente a doença.

ABSTRACT

MIRANDA, Ileana Costa. Lectin histochemistry evaluation of liver and mesenteric lymph node of buffaloes kept in Brachiaria spp. 73 p. Dissertation (Master Science in Veterinary Medicine, Animal Pathology). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Animals grazing Brachiaria spp commonly present foamy macrophages isolated or grouped in the liver, and crystals within biliary ducts, but the pathogenesis of formation and the type of material stored on these cells is unknown. Lectin histochemistry evaluation may assist in the detection of specific carbohydrate residues, and steroidal saponins (secondary glycosylated metabolites) have been identified in the crystals and inside the foam cells, that probably are liable for damage the liver leading to accumulation of phylloerythrin. This study aims to develop and standardize the use of lectin histochemistry to detect glycosylated metabolites in tissues of buffaloes kept in different Brachiaria spp pastures in Brazil. Fragments of liver and mesenteric lymph node from 40 animals were analyzed 10 buffaloes that were kept in predominant pasture of B. decumbens for 12 months; 10 buffaloes that were kept in pasture with a predominance of B. brizantha for 18 months; 10 buffaloes that were kept in pasture of B. brizantha for approximately four years; and as a negative control, 10 buffaloes that were maintained in native pasture without Brachiaria spp since birth. Fourteen lectins were tested (Con-A, SBA, WGA, DBA, UEA, RCA, PNA, GSL-I, PSA, LCA, PHA-E, PHA-L, SJA and SWGA), in a total of 1120 evaluated fragments. Previous studies demonstrated that PNA showed great binding reactivity for foamy macrophages in bovine and ovine. In the present study, SWGA presented high specificity and marked binding reactivity for foamy macrophages; WGA, GSL, PHA-E and PHA-L showed moderate to marked reactivity but low specificity for foamy macrophages; the other lectins didn't show significant reactivity or specificity. It remains unclear why there is this difference in lectins binding reactivity, but it's known that the nature of material accumulated in foamy macrophages may vary depending on the species of Brachiaria ingested, the age of the plant, or according to the type and proportion of stored saponins in plants due to seasonality. Furthermore, it is suggested that reactivity differences can also occur due to differences in the metabolism of animal species, presence or absence of photosensitivity, clinical course and glicoconjugades intake time. Moreover, there was no reactivity difference between the collected fragments of animals that grazed in B. decumbens for 12 months and B. brizantha for 18 months, and the decreased presence of foamy macrophages and its lectin histochemical binding in animals that fed on B. brizantha for a longer time indicates that the animals can pass through an adaptation process according to the time of ingestion of the plant. Lectin histochemistry analysis can be used to characterize the material stored in foamy macrophages present in liver and mesenteric lymph node of buffaloes that graze in Brachiaria spp pastures and helps to clarify the pathogenesis of these cells. Lectin histochemical analysis of animals that graze in Brachiaria spp pastures needs further detailed studies in conjunction with other histochemical and biochemical tests to fully characterize the disease.