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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204435

Resumo

Objetivou-se com este estudo confirmar a exposição por Neospora spp através da técnica de western blotting em eqüídeos da microrregião Ilhéus-Itabuna. Das 516 amostras testadas na RIFI, 80 foram selecionadas para a realização do western blotting. Nove amostras foram positivas para Neospora spp., seis apresentaram infecção simultânea a N. caninum e T. gondii, 33 foram positivas apenas para T. gondii e 32 amostras negativas para ambos parasitos. Taquizoítos da cepa Nc-Bahia foram cultivados em monocamadas de células Vero, mantidos com meio RPMI suplementado com soro fetal bovino e com adição de antibiótico e antimicótico. Para cada reação de western blotting utilizou-se um volume de 100 L de solução tampão de amostra e antígeno purificado (4x107 de taquizoítos). As proteínas foram separadas em um gel de poliacrilamida 12%, submetidos a eletroforese vertical por duas horas. Após separadas, as proteínas foram transferidas para uma membrana de PVDF, bloqueadas durante 12 horas com a solução de leite em pó desnatado (5%) e PBS-Tween, cortadas em tiras de 0,25cm de comprimento, incubadas por duas horas com os anticorpos primários e secundário e reveladas. A migração das bandas na membrana foi medida e os dados tabulados em uma planilha do software Excel® Microsoft, onde o peso molecular das proteínas foi calculado com base no RF das amostras e na equação da reta gerada no gráfico. Dezoito amostras foram positivas (3,48% - 18/516), reconhecendo pelo menos um dos antígenos de 17, 35 - 37 e 43 KDa. A proteína de 35KDa foi reconhecida em maior frequência. Com base nos resultados, conclui-se que há exposição dos equideos da microrregião Ilhéus- Itabuna ao Neospora spp., com infecção diagnosticada em maior proporção na espécie equina.

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The objective of this study was to confirm the exposure by Neospora spp through Western blotting technique in equids from the Ilhéus-Itabuna microregion. Of the 516 Samples tested in the IFAT, 80 were selected for western Blotting. Nine samples were positive for Neospora spp., Six presented Simultaneous infection with N. caninum and T. gondii, 33 were positive only for T. Gondii and 32 negative samples for both parasites. Tachyzoites of the Nc-Bahia strain were grown in monolayers of Vero cells, maintained with RPMI medium Supplemented with fetal bovine serum and with addition of antibiotic and antimycotic. For Each western blotting reaction was used a volume of 100 l of buffer solution And purified antigen (4x107 tachyzoites). The proteins were Separated on a 12% polyacrylamide gel, submitted to vertical electrophoresis by two hours. After separated, the proteins were transferred to a membrane Of PVDF, blocked for 12 hours with the skimmed milk powder solution (5%) and PBS-Tween, cut into strips of 0.25cm in length, incubated for Two hours with the primary and secondary antibodies and revealed. The migration of Bands were measured and the data tabulated in a software spreadsheet Excel® Microsoft, where the molecular weight of the proteins was calculated based on the RF of the samples and in the equation of the line generated in the graph. Eighteen samples were Positive antigens (3.48% - 18/516), recognizing at least one of the antigens of 17, 35 - 37 and 43 KDa. The 35KDa protein was recognized at higher frequency. Based In the results, it is concluded that there is exposure of the equids of the Ilhéus-Itabuna to Neospora spp., With infection diagnosed to a greater

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