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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204476

Resumo

O objetivo do presente estudo foi analisar o perfil proteômico do fluido folicular de éguas mestiças em diferentes estádios do desenvolvimento. Foram colhidos 17 ovários, de éguas sadias (de acordo com o S.I.F.), de um abatedouro da região do norte do Paraná e encaminhados ao laboratório para análise proteômica. No laboratório, os folículos foram dissecados e o diâmetro mensurado com paquímetro. De acordo com o diâmetro, os folículos foram separados em 2 grupos distintos, folículos menores (14 a 21 mm) e maiores (31 a 36 mm). Cada folículo foi aspirado e o líquido folicular centrifugado a 600xg, por 10 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, o sobrenadante foi coletado e centrifugado a 15.000xg por 30 minutos à 4oC. O sedimento foi descartado e o sobrenadante armazenado a -20ºC. Para a realização da análise eletroforética, realizouse a depleção da albumina, principal proteína identificada no fluido folicular (FF). A eletroforese unidimensional SDS-PAGE foi conduzida utilizando-se mini-géis em cuba vertical, com gel de separação de poliacrilamida a 12%. Não foram encontradas diferenças significativas entre as concentrações de proteína total nos grupos estudados, sendo a mediana e os quartis (25% e 75%) dos folículos menores e maiores de 18,9 mg/mL (16,6 e 24,4 mg/mL) e 20,0 mg/mL (17,3 e 20,6 mg/mL), respectivamente. Foram detectadas 19 bandas nas amostras de líquido dos folículos menores e maiores, cuja massa molecular variou de 300 kDa a 9,3 kDa, sendo 18 presentes nos menores e 14 nos maiores. A identificação das proteínas foi realizada por espectrometria de massas e a ontologia gênica em relação à função molecular e localização celular de cada proteína foi elaborada. A principal proteína encontrada foi a albumina, no entanto houve maior expressão de outras proteínas nos grupos estudados.

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The aim of this study was to analyze the proteomic profile of follicular fluid mares at different stages of development. They were harvested 17 ovaries of healthy mares, a slaughterhouse in the northern region of Parana and sent to the laboratory for proteomics analysis. In the laboratory, the follicles were dissected and the diameter measured with a caliper. According to the diameter of the follicles were separated into two distinct groups, smaller follicles (14 to 21 mm) and larger (31 to 36 mm). Each follicle is aspirated and follicular fluid centrifuged at 600xg for 10 minutes at room temperature. Then, the supernatant was collected and centrifuged at 15.000xg for 30 minutes at 4oC. The pellet was discarded and the supernatant stored at -20. To perform the electrophoretic analysis, there was depletion of albumin, the main protein identified in the follicular fluid (FF). The one-dimensional SDS-PAGE was performed using mini-gels in a vertical vessel with polyacrylamide separating gel of 12%. No significant differences were found between total protein concentrations in groups, with a median and quartiles (25% and 75%) of smaller follicles and over 18.9 mg / ml (16.6 and 24.4 mg / mL) and 20.0 mg / ml (17.3 and 20.6 mg / mL), respectively. They were detected 19 bands in the fluid samples of smaller and larger follicles, whose molecular weight ranged from 300 kDa to 9.3 kDa, 18 present in the lower and 14 in the largest. The identification of proteins was performed by mass spectrometry and gene ontology in relation to molecular function and cellular localization of each protein was prepared. The main protein found was albumin, however there was a higher expression of other proteins in the groups studied.

Biblioteca responsável: BR68.1