AVALIAÇÃO DE SOLUÇÕES DILUIDORAS E TAXAS DE DESCONGELAÇÃO NO SÊMEN CRIOPRESERVADO DE Prochilodus brevis

RESUMO

A curimatã comum é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes soluções diluidoras e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + Dimetilsulfóxido 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + Dimetilsulfóxido 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação 25 °C 30 s-1; 30 °C 16 s-1; 40 °C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal (CASA). As características do sêmen in natura assemelharam-se, em sua maioria, às encontradas na literatura. Para o sêmen criopreservado, os maiores resultados de motilidade total e velocidade curvilinear (VCL) foram obtidos utilizando Glicose e DMSO, independente da taxa de descongelação empregada. Para a velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP), o DMSO proporcionou os melhores resultados, independente do diluente e da taxa de descongelação. No que se refere à vitalidade, os maiores índices foram alcançados quando se utilizou DMSO e as taxas de descongelação de 30 °C 16 s-1 ou 40 °C 12 s-1. Quanto à análise morfológica, a maior porcentagem de espermatozoides normais foi obtida utilizando as taxas de 25 °C 30 s-1 e 40 °C 12 s-1, independente do meio de congelação. A qualidade seminal sofre interferência do meio de congelação, bem como da interação entre seus componentes (diluente e crioprotetor) e da taxa de descongelação empregada. Sob as condições metodológicas empregadas, recomenda-se a criopreservação do sêmen de P. brevis em 5% Glicose + DMSO 10% e descongelação a 30 °C durante 16 segundos ou 40 °C durante 12 segundos.

ABSTRACT

Curimatã comum is a migratory fish, an important component of river ecosystem and appreciated in the northeastern cuisine. However, human activities have threatened their survival. Thus arises in the researchers the interest in the development of genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determining the appropriate freezing media and thawing rate are fundamental steps that will enable the use of this biotechnology in the production of common curimatã, reducing the risk to their survival. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of P. brevis cryopreserved semen. For that, 18 hours before semen collection, males received a single dose of pituitary extract of carp. Each animal was sedated with eugenol solution-based and the semen was collected. Samples were diluted in four freezing media (5% Glucose + methyl glycol 10%; 5% Glucose + Dimethylsulfoxide 10%; 0.9% NaCl + methyl glycol 10%, 0.9% NaCl + Dimethylsulfoxide 10%) loaded in straws 0, 25 mL and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen was thawed after seven days in three thawing rates 25 °C 30 sec-1; 30 °C 16 sec-1; 40 °C 12 sec-1. The motility, vitality and morphology analyzes were performed by computer assisted sperm analysis (CASA). The in natura semen characteristics resembled, mostly, those found in the literature. For cryopreserved semen, the greatest results of total motility and curvilinear velocity (VCL) were obtained using Glucose and DMSO, regardless of thawing rate employed. For the straight-line velocity (VSL) and average path velocity (VAP), DMSO showed the best results, regardless of the diluent and thawing rate. As regards the vitality, the highest values were achieved when DMSO and thawing rates 30 °C/16 sec or 40 °C/12 sec were used. As to morphological analysis, the greatest percentage of normal sperm cells was obtained using the rates 25 °C/30 sec and 40 °C/12 sec, regardless of freezing media. The sperm quality suffers interference from the freezing media, as well as the interaction between its components (diluent and cryoprotectant) and the thawing rate used. Under the methodological conditions employed, it is recommended to P. brevis semen cryopreservation the use 5% Glucose + cryoprotectant DMSO 10% and thawing rate at 30 °C for 16 seconds or 40 °C for 12 seconds.