Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204493

Resumo

A detecção do material genético do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) em sêmen de machos recentemente infectados, pode ocorrer antes mesmo da resposta sorológica. Adicionalmente, a transmissão do vírus por inseminação artificial com sêmen infectado foi recentemente comprovada. Contudo, há necessidade de buscar maior conhecimento do que acontece neste fluido em todas as fases da infecção. Além do sêmen, deve-se atentar a presença do vírus em outras amostras como em saliva, que tem permitido o diagnóstico de doenças infecciosas em humanos e animais. Dessa forma, o primeiro objetivo deste estudo foi investigar a presença do DNA proviral do CAEV em amostras de saliva de reprodutores infectados. Para tanto dez machos caprinos divididos em dois grupos, G1 (n = 8) composto por animais positivos e G2 (n = 2) com animais negativos como controle, tiveram a saliva coletada em jejum de 12h, e obtida através de sucção do fluido da cavidade oral na região lateral dos dentes molares inferiores. A técnica de detecção utilizada foi a reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) para amplificar um fragmento final de 187 pb do DNA proviral do CAEV. Como resultado, constatou-se que 100% dos animais do grupo positivo amplificaram o fragmento do DNA proviral na saliva, contudo houve resultados positivos e negativos para o mesmo animal em momentos diferentes. Com relação ao grupo controle nenhum animal apresentou resultado positivo. Desse modo, ficou comprovando que caprinos infectados eliminam o vírus na saliva, e possivelmente as células da saliva que o albergam podem produzir vírus infeccioso. O segundo objetivo do estudo foi demonstrar a eliminação do CAEV no sêmen de reprodutores nas fases aguda e crônica da infecção. Foram utilizados onze machos caprinos divididos em dois grupos, G1 (n = 5) composto por machos experimentalmente infectados para representar a fase aguda da artrite encefalite caprina (CAE), e G2 (n = 6) grupo com infecção crônica, constituído por reprodutores naturalmente infectados. O sêmen foi coletado pelo método de vagina artificial, e a técnica de detecção viral foi (n PCR). Os resultados mostraram o inicio da infecção como o período de maior detecção do CAEV no sêmen, pois, o fragmento do DNA proviral foi amplificado em 4/5 (80%) dos animais pertencentes ao grupo G1, enquanto que no G2 o provirus foi detectado em 4/6 (66,7%) dos animais, porém, não foi observada diferença significativa (P>0.05) entre as fases. Contudo, foi observado que os dois grupos apresentaram três padrões de eliminação do provirus no sêmen: ausente, contínuo e intermitente, ressaltando que a eliminação intermitente prevaleceu em relação às demais. Desse modo, tendo em vista a intermitência da eliminação viral no sêmen, esta possa ser um indicador para seleção de ejaculados livres do vírus por meio de técnicas moleculares, para um possível aproveitamento na reprodução utilizando biotécnicas reprodutivas.

---

The detection of the genetic material of the caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) in the semen of goats recently infected may happen even before the serological response. In addition, CAEV has also been proved to be transmitted through artificial insemination. However, there is need to seek greater knowledge about what happens in this fluid at all stages of infection. Moreover, besides semen, attention should be paid to the presence of the virus in other samples such as saliva, which is target of diagnosis of infectious diseases in humans and animals. Thus, the first objective of this study was to determine the presence of proviral DNA in saliva of infected goats. Ten male goats where assorted into two groups: G1 (n = 8) composed of positive animals, and G2 (n = 2), composed of negative animals for control. Saliva was collected in fasting animals (12 h), by suctioning it from the oral cavity of the lateral side of the lower molars. Nested polymerase chain reaction (nPCR) was used to amplify a final 187 bp fragment of the CAEV proviral DNA. As a result, it was found that 100% of the animals of the positive group amplified the fragment in the saliva, although there were positive and negative results from the same animal at different times. None of the animals of the control group tested positive. Nevertheless, it was proved that infected goats excrete the virus in their saliva, and possibly salivar cells that shelter it can produce infectious virus. The objective of the second study was to evidence CAEV elimination in seminal plasma of male goats with acute and chronic infection. Eleven male goats were divided into one of two groups, G1 (n = 5), consisting of experimentally infected males to represent the acute CAE phase, and G2 (n = 6), consisting of naturally infected reproducers which had chronic infection. The semen was collected by the artificial vagina method, and viral detection was also performed by nested PCR. The results showed that the beginning of the infection was the period of greatest CAEV elimination in the semen, because the target fragment was amplified in 4/5 (80%) of the animals belonging to the group G1, whereas in the G2 the provirus was detected in 4/6 (66,%) the animals, bat not significantly different (P > 0.05) between the phases. However, the two groups presented three elimination patterns of the provirus in the semen: absent, continuous and intermittent, regardless of the phase of infection. Among these, intermittent elimination prevailed. Nevertheless, the intermittent viral elimination from the semen indicates that molecular biology techniques could be used to select virus-free ejaculates for possible use in reproduction by reproductive biotechniques.

Biblioteca responsável: BR68.1