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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204541

Resumo

A constante preocupação com a saúde humana e animal tem resultado na evolução de metodologias científicas que utilizam ferramentas biotecnológicas que objetivam o desenvolvimento de novas técnicas, produtos, processos ou adaptações, além de possibilitar a compreensão dos mecanismos biológicos dos organismos. A papilomatose bovina é uma infecção viral que pode ser considerada negligenciada por parte das empresas do setor privado que não buscam soluções para o controle e profilaxia, principalmente porque ocorre com maior frequência em animais de pequenos rebanhos, principalmente dedicados à exploração leiteira. O papilomavírus bovino (BPV), agente etiológico dessa doença, é um vírus não cultivável in vitro. Esse é o principal aspecto biológico que dificulta o desenvolvimento de trabalhos de pesquisa com esse vírus e que impõe a obrigatoriedade da utilização de recursos biotecnológicos para o melhor conhecimento dessa infecção e para o desenvolvimento de métodos de diagnóstico, controle e profilaxia. O objetivo desse estudo foi o desenvolvimento de partículas semelhantes a vírus (VLPs virus-like particles) a partir da proteína L1 recombinante de BPV2 expressa em células de mamíferos (BSC-40) infectadas com vírus vaccínia como vetor. Para facilitar as etapas de recuperação e purificação das VLPs por meio de cromatografia de afinidade foi avaliada a inserção de uma cadeia peptídica constituída por seis moléculas de histidina. A proteína L1 recombinante de BPV2 contendo uma cauda de histidina possibilitou a formação de VLPs que foram visualizadas por microscopia eletrônica de transmissão. A possibilidade do uso das VLPs em sistemas de diagnóstico e, principalmente, para a elaboração de vacinas para a profilaxia da infecção pelo BPV2 em bovinos motivou a solicitação junto ao Instituto Nacional de Propriedade Intelectual (INPI) de um pedido de patente de processo que foi registrado sob número BR 1020140329919.

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The constant concern for human and animal health has resulted in the evolution of scientific methodologies using biotechnological tools that aim to develop new techniques, products, processes or adaptations, and allows wider understanding of the biological mechanisms of organisms. Bovine papillomatosis is a viral infection that can be considered neglected by the private companies which do not develop alternatives for the control and prevention, mainly because of occurrence of the disease more frequently in small dairy cattle herds. The bovine papillomavirus (BPV), the etiologic agent of this disease, does not grow in conventional cell culture. This is the main biological aspect which hampers the development of research with this virus and requires the compulsory use of biotechnological resources for better understanding of this infection and the development of methods of diagnosis, control, and prevention. The aim of this study was to develop virus-like particles (VLPs) from BPV2 recombinant L1 protein expressed in mammalian cells (BSC-40) infected with vaccinia virus as vector. In order to facilitate the recovery and purification steps of VLPs by affinity chromatography the inclusion of a peptide chain consisting of six histidine molecules in the recombinant protein was evaluated. The BPV2 recombinant L1 protein, containing a histidine tag, allowed the formation of VLPs that were visualized by transmission electron microscopy. The possibility of the use of VLPs in diagnostic systems and especially for the development of vaccines for prophylaxis of the BPV2 infection in cattle stimulate the request from the National Institute of Industrial Property (INPI) of a process patent application that was registered under number 1020140329919 BR.

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