Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-204543

Resumo

O Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que acomete todos os animais homeotermos e o homem. O consumo de carne suína crua ou mal cozida contendo cistos é considerada uma das mais importantes fontes de infecção para o ser humano. Assim, o desenvolvimento de vacinas, objetivando a proteção contra a formação de cistos teciduais, pode contribuir para o controle do T. gondii. O objetivo do presente estudo foi valiar a resposta imune e a proteção contra a presença do Toxoplasma gondii em tecidos de suínos imunizados com proteínas nativas de roptrias e proteína recombinante (rROP2) do T. gondi, pelas vias intranasal e intramuscular. No primeiro experimento, foram utilizados 13 suínos mestiços, divididos em três grupos, G1 (n=6) receberam proteínas de roptrias (200 g) associadas ao Quil-A (50 g), G2 (n=4) e G3 (n=3) receberam Quil-A (50 g) e PBS, respectivamente. Os tratamentos foram administrados em intervalos de 21 dias pela via nasal. Sete dias após a última dose da vacina dois animais do G1 foram eutanasiados para coleta de linfonodos mesentéricos e os demais animais do G1 foram desafiados com 103 oocistos infectantes da cepa VEG e abatidos 45 dias após o desafio. A imunidade humoral (IgG e IgM) e a imunidade celular foram avaliadas pelo o Ensaio Imunoenzimatico Indireto (ELISA) e por proliferação de linfócitos, respectivamente, e a presença de cistos nos cérebros dos suínos foi avaliada pela técnica de bioensaio em camundongos. Em conclusão, a imunização em suínos pela via nasal com proteínas de roptrias e Quil-A como adjuvante foi capaz de estimular alta resposta celular em linfócitos de linfonodos mesentéricos e proteção parcial contra a formação de cistos cerebrais. No segundo experimento foram utilizados 12 suínos mestiços, divididos em três grupos, G1 (n=4) receberam proteínas recombinantes ROP2 do T. gondii (200 g) associadas ao ISCOMATRIX, G2 (n=4) e G3 (n=4) receberam ISCOMATRIX e PBS, respectivamente. Todos os tratamentos foram administrados pela via nasal nos dias 0, 14, 28, 42, 56 e 72 e pela via intramuscular nos dias 86, 93 e 100. No dia 110 todos os animais foram desafiados com 4x104 oocistos infectantes da cepa VEG. A imunidade humoral (IgG, IgM e IgA) foi avaliada utilizando ELISA e a presença de T. gondii no sangue e tecidos (língua, masseter, coração e diafragma) foi avaliada pela técnica de bioensaio em camundongos. Todos os animais do G1 produziram anticorpos (IgG, IgM e IgA) acima do ponto de corte, no dia do desafio. Animais do G2 e G3 permaneceram com títulos abaixo do ponto de corte antes do desafio. Após o desafio foi observado produção de altos títulos de anticorpos produzidos nos animais imunizados e soro conversão observada em nove dias pós desafio nos animais do grupo controle e foi observado proteção parcial contra a presença do T. gondii nos tecidos. Como conclusão as proteínas de roptrias do T. gondii administradas pela via nasal com Quil-A estimularam a resposta imune celular intestinal e as proteínas recombinantes do T. gondii administradas pela via intramuscular com ISCOMATRIX estimularam a produção de altos títulos de anticorpos em suínos e em ambos os estudos foram verificadas a proteção parcial contra a presença de cistos teciduais do T. gondii. Para um melhor estímulo da resposta imune, estudos sobre imunização em suínos envolvendo duas ou mais proteínas recombinantes do T. gondii associadas na mesma vacina devem ser avaliadas no futuro, além de estudos sobre imunizações objetivando a redução de lesões oculares causadas pelo Toxoplasma gondii em suínos

---

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that affects all warm-blooded animals and humans. Pork meat containing tissue cysts is considered one of the most important routes of transmission to humans. Vaccination of domestic animals, aiming to reduce the number of tissue cysts, may be one of the strategies for the control of T. gondii. The aim of this study was evaluate the immune response and protection against the presence of Toxoplasma gondii in tissues of pigs immunized with crude rhoptry proteins and recombinant proteins (rROP2) of T. gondii by intranasal and intramuscular route. In the first experiment we used 13 mixed-breed pigs divided into the following three groups: G1 (vaccinated-challenged, n = 6), which received the rhoptry vaccine (200 (g/dose); G2 (adjuvant-challenged, n = 4), which received PBS plus Quil-A; and G3 (unvaccinated-challenged, n = 3), which was the control group. The treatments were performed intranasally at days 0, 21, and 42. Three pigs from G1 produced IgG and IgM antibody levels above the cut-off in the ELISA on the challenge day. Partial protection was observed in G1 at the chronic phase of infection when compared with G3. The preventable fractions were 41.6% and 6.5%, in G1 and G2, respectively. The results of this study suggest that rhoptry proteins plus Quil-A stimulated humoral, local, and systemic immune responses, which were able to partially protect the brain from cyst formation. In the second experiment we used 12 mixed-breed pigs divided into three groups, G1 (vaccinated-challenged, n=4) received recombinant ROP2 proteins (200g/ dose), G2 (adjuvant-challenged, n=4) received PBS plus Quil-A, and G3 (unvaccinated-challenged, n=3) was considered control group. The treatments were performed at days 0, 14, 28, 42, 56 e 72 by intranasal route and days 86, 93 e 100 by intramuscular route. At day 110, all animals of this study were challenged with 4x104 infective oocysts of the VEG strain. The animals were examined daily for clinical signs. Humoral immune response (IgG, IgM and IgA) were evaluated weekly by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The presence of T. gondii in blood and tissues (tongue, masseter muscle, heart and diaphragm) was assessed by bioassay in mice. All the animals of G1 produced antibodies (IgG, IgM and IgA) above the cut-off point on the day of challenge. The G2 and G3 remained with titers below the cut-off point before the challenge. It was observed high production of antibodies titersin immunized animals and seroconversion atday 9 after challenge in the animals from control group. Partial protection against presence of T. gondii in tissues was observed. For better stimulation of the immune response, immunization studies in pigs involving two or more recombinant proteins of T. gondii associated in the same vaccine should be evaluated in the future. Studies of immunization aiming to reduce eye damage caused by Toxoplasma gondii in pigs should also be encouraged.

Biblioteca responsável: BR68.1