Criopreservação de sêmen bovino com antioxidantes: avaliações funcionais e fecundação in vitro

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi avaliar a adição de antioxidantes no processo de criopreservação de sêmen bovino, a partir de testes complementares (motilidade e vigor espermáticos pós criopreservação, teste de termorresitência rápido, integridade de membranas plasmática e acrossomal, estresse oxidativo e morfologia espermática) e na fecundação in vitro (FIV). Para tanto, o ejaculado de nove animais foram divido em quatro frações, correspondente a cada tratamento, sendo estes grupo controle sêmen diluído com extensor Tris gema; grupo vitamina sêmen diluído em Tris gema acrescido de 2,5 mM/mL de vitamina C; grupo glutationa sêmen diluído em Tris gema acrescido de 2,5 mM/mL de glutationa reduzida e o grupo associado sêmen diluído em Tris gema acrescido de vitamina C e glutationa reduzida com metade das concentrações (1.25mM/mL). Posteriormente o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetidas a criopreservação utilizando equipamento automatizado TK-3000®. Para FIV, ovários de abatedouros foram aspirados para obtenção dos oócitos grau I e II. Estes foram submetidos à maturação in vitro (MIV), seguida de fertilização in vitro (FIV) onde cada gota contendo os oócitos maturados, foi adicionada o sêmen capacitado correspondente a cada tratamento. A taxa de fecundação foi atribuída de embriões divididos em dois ou mais blastômeros. Houve diferença estatística (P< 0,05) na motilidade espermática para o grupo associado, contudo para vigor espermático os grupos não diferiram, o mesmo ocorreu para integridade de membrana plasmática e acrossomal. O grupo associado apresentou maior percentual de células com estresse oxidativo (P< 0,05) e menores percentuais de defeitos espermáticos maiores. O grupo glutationa apresentou maior taxa de fecundação (P< 0,05). Dessa forma, concluiu-se que a associação da vitamina C e glutationa reduzida favoreceu a motilidade espermática pós descongelação, porém os antioxidantes não apresentaram efeito preventivo quanto aos danos estruturais sofridos pelas membranas plasmáticas. E que associação dos antioxidantes proporciona maior estresse oxidativo e o uso de glutationa reduzida garante maior capacidade fecundante.

ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate the addition of antioxidants in cryopreservation process of bovine semen, from complementary tests (stamina and sperm motility post thawing, quick thermos-resistance test, acrosomal and plasma membranes integrity, oxidative stress and sperm morphology) and in in vitro fertilization (IVF). Therefore, the ejaculate from nine animals was divided in four fractions, corresponding to one treatment each, these being control group semen diluted in Tris yolk; vitamin group semen diluted in Tris yolk plus 2.5 mM/mL of vitamin C; glutathione group semen diluted in Tris yolk plus 2.5 mM/mL of reduced glutathione and associated group semen diluted in Tris yolk plus half of the concentration (1.25 mM/mL), later the semen was packed into french straws and submitted to cryopreservation through an automatized equipment, TK 3000®. For IVF, ovaries from slaughterhouses were aspirated to obtain oocytes grades I and II. These were submitted to in vitro maturation (IVM) followed by IVF; where each drop containing the matured oocytes, was combined with the capacitated semen, corresponding to each treatment. Fertilization rate was assigned to embryos divided into two or more blastomeres. There was statistical difference (P< 0.05) for sperm motility for the associated group, however the groups didnt differ for sperm stamina, the same occurred to acrosomal and plasma membranes integrity. The associated group showed higher percentage of cells with oxidative stress (P< 0.05) and smaller percentage for major sperm defects. Glutathione group showed higher fertilization rate (P< 0.05). Therefore, we can conclude that the association of vitamin C and reduced glutathione favored sperm motility post thawing, however, the antioxidants didnt show a preventive effect about the structural damage suffered by plasma membranes. And that the association of the antioxidants provides higher oxidative stress and the use of reduced glutathione guarantees increased fertilizing capacity.