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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204597

Resumo

O câncer é considerado o resultado do acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas de uma célula que adquire a capacidade de se proliferar de maneira acelerada. O tumor mamário é o mais frequente na espécie canina representando cerca de 52% de todos os tumores da referida espécie. Sabe-se que o câncer é decorrente de alterações nos genes que controlam o ciclo celular, tais como aqueles que codificam inibidores de cinases dependentes de ciclinas, com destaque para o gene p15INK4B. Sabe-se que este gene sofre alterações genéticas e epigenéticas em diversos tumores humanos, inclusive o de mama. Apesar disso, pouco se sabe sobre suas alterações em tumores mamários caninos. Assim sendo, esta pesquisa teve como objetivo verificar o estado de metilação do gene p15INK4B bem como suas as alterações genéticas (mutações/polimorfismos) em tumores mamários em cadelas e correlacionar com dados histopatológicos e clínicos. Foram analisadas 40 amostras de 23 animais submetidos à mastectomia no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural da Amazônia. O DNA total de cada amostra foi extraído pelo método fenol-clorofórmio, e submetido à reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida pelo sequenciamento direto, para a análise de mutações dos éxons do gene p15INK4B. Para a análise de metilação, o DNA foi convertido utilizando o bissulfito de sódio e a região promotora do gene de interesse analisada por Bissulfite Sequencing PCR. Para as análises estatísticas foram utilizados os testes Qui-Quadrado Exato de Fisher e Odds Ratio. A metilação do promotor p15INK4B foi observada em 72,7% (8/11) de todas as amostras, sendo que 80% (4/5) das amostras tumorais e 66,7% (6/4) das amostras não tumorais estavam metiladas. Pela análise genética foi observado apenas um polimorfismo (transversão) CA localizado na posição 4435664 (éxon 1.1) do cromossomo 11 canino. A presença deste polimorfismo, apesar dos resultados não serem estatisticamente significantes, sugere um aumento no risco de desenvolver tumores quando na presença de determinadas características histopatológicas e clínicas. Os demais éxons analisados (1.2 e 2) não apresentaram qualquer tipo de mutação e/ou polimorfismo. Desta forma, pode-se concluir que a metilação da região promotora p15INK4B, bem como alterações genéticas nos éxons 1.2 e 2 parecem não estar relacionados ao desenvolvimento de tumores mamários caninos. Apesar dos resultados sugerirem a presença de um marcador da tumorigênese mamária em cães, mais estudos com um número maior de amostras, são necessários para uma melhor compreensão da influência das alterações genéticas e epigenéticas do gene p15INK4B em tumores mamários de cães.

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Cancer is considered the result of the accumulation of genetic and epigenetic alterations of a cell which results in a dysregulated proliferation. Mammary tumors are the most common type of cancer in dogs representing about 52% of all tumors of the species. It is known that cancer is caused by alterations in genes that control the cell cycle, such as those encoding cyclin-dependent kinases inhibitors, as the p15INK4B gene. It is known this gene undergoes genetic and epigenetic alterations in several human tumors, including breast cancer. Despite this, little is known about it changes in canine mammary tumors. Therefore, this study aimed to determine the methylation status of p15INK4B gene and its genetic changes (mutations/polymorphisms) in mammary tumors in female dogs and to correlate the results with histopathological and clinical data. Forty samples from 23 animals undergoing mastectomy at the Veterinary Hospital of the Amazon Federal Rural University were analyzed. The DNA from each sample was obtained by the phenol-chloroform method and subjected to polymerase chain reaction (PCR), followed by direct sequencing for mutation analysis of all exons of the p15INK4B gene. For the methylation analysis, DNA was converted using sodium bisulfite, and the promoter region of the gene analyzed by Bissulfite PCR Sequencing. For statistical analysis, Fisher's exact test, chi-square test and odds ratio were used. The promoter methylation of the p15INK4B was observed in 72.7% (8/11) of all samples, and 80% (4/5) of tumor and 66.7% (6/4) of the non tumoral samples were methylated. For the genetic analysis, only one polymorphism (transversion) CA located at position 4,435,664 (exon 1.1) of the chromosome 11 canine was observed. The presence of this polymorphism, although the results were not statistically significant, suggests an increased risk of developing tumors in the presence of certain histopathological and clinical characteristics. The remaining analyzed exons (1.2 and 2) did not show mutation and/or polymorphism. Thus, we can conclude that the methylation of p15INK4B promoter region as well as genetic alterations in exons 2 and 1.2 do not seem to be related to the development of canine mammary tumors. Although the results suggest the presence of a marker of mammary tumorigenesis in dogs, further studies with a larger number of samples are needed for a better understanding of the influence of genetic and epigenetic alterations of the p15INK4B gene in mammary tumors of dogs.

Biblioteca responsável: BR68.1