EFEITOS DO ACETATO DE DESLORELINA SOBRE A PRODUÇÃO IN VIVO E IN VITRO DE EMBRIÕES DE GATAS DOMÉSTICAS

RESUMO

O acetato de deslorelina promove uma contracepção de longa duração segura e eficaz, porém a reversibilidade espontânea é progressiva e assincrônica. O objetivo geral foi avaliar os efeitos do acetato de deslorelina sobre a produção in vivo e in vitro de embriões de gatas domésticas. Para tanto foram realizados 2 experimentos. Experimento 1 Objetivou-se avaliar a taxa de produção de embriões in vitro em gatas tratadas com acetato de deslorelina. Foram utilizadas 21 fêmeas (Tratado n=11 e Controle n=10). Onze gatas receberam um implante de deslorelina (4,7mg/animal) e o tratamento durou 6 meses. Após o tratamento, todas as fêmeas (Tratado e Controle) foram submetidas à OSH para que seus ovários fossem incluídos em rotinas de produção de embriões in vitro (PIV). A taxa de recuperação de COC foi submetida ao teste t de Student. As taxas de clivagem e blastocisto foram expressas em porcentagem e submetidas ao teste exato de Fisher. Todas as análises foram realizadas no programa GraphPad v5.0, P<0.05. Uma gata apresentou galactorréia e foi retirada do grupo experimental. Foram obtidos 184 COC grau I, a taxa de clivagem foi em média de 55,97% (total de 103 mórulas) e de blastocisto de 33,99% (total de 33 blastocistos) no grupo Controle. Já no grupo Tratado foram obtidos 83 COC grau I e a taxa de clivagem foi em média 60,24% (total de 50 mórulas) e de blastocisto foi de 36% (total de 18 blastocistos). Só houve diferença estatística entre os grupos na taxa de recuperação de COC grau I. A taxa de recuperação de COC foi menor em gatas tratadas, porém a PIV apresentou taxas similares à de fêmeas não tratadas. Devem-se considerar as variações individuais no grupo tratado. Experimento 2 Objetivou-se avaliar a produção de embriões in vivo, a taxa de concepção, bem como a presença de receptores de estrógeno e progesterona no útero, e receptores de LH e FSH em ovários de gatas submetidas ao tratamento com acetato de deslorelina. Foram utilizadas 25 gatas domésticas, 15 foram tratadas com 4,7mg de acetato de deslorelina por 3 meses. Após esse período os implantes foram retirados e o estro e a ovulação induzidos. Cinco gatas foram mantidas com um macho comprovadamente fértil e submetidas à monta natural, a gestação foi confirmada 30 dias após a última monta. As outras 20 fêmeas foram castradas três dias após indução da ovulação e seus ovários e úteros foram avaliados por imunoistoquímica (receptores de estrógeno ER-¿ e progesterona PgR ¿ útero; receptores de LH e FSH ¿ ovário). Para análise estatística foi utilizado o teste exato de Fisher, com tabelas de contingência 2x2 para avaliar diferenças entre os grupos avaliados (P < 0,05). O acetato de deslorelina suprimiu a atividade ovariana nas gatas tratadas, e a indução do estro e ovulação foi realizada com sucesso. Nenhuma das fêmeas do grupo gestação estava prenhe e uma fêmea desenvolveu piometra. A imunoexpressão de ER-¿ apresentou declínio discreto quando comparado com os animais controle, a expressão de PgR se apresentou complexa e variável, sendo reduzida a quase nulo em alguns animais. A expressão de FSH-R e LH-R não foram alteradas. Concluiu-se que o primeiro estro induzido é infértil e que a falha gestacional ocorre provavelmente devido à alteração da expressão de PgR uterina.

ABSTRACT

Deslorelin acetate promotes a long, safe and efficient contraception; however reversibility is consider progressive and asynchronous. We aim to evaluate the effects of deslorelin acetate on in vitro and in vivo embryo production in domestic cats. For that 2 experiments were performed. Experiment 1 The objective was to investigate the effect of contraceptive treatment with deslorelin acetate in in vitro embryo production and oocyte recovery in domestic queens. Twenty one queens (Treated n=11 and Control n=10) and one tom were used. Eleven queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) during 6 months. Thereafter all females (treated and control) were spayed and the ovaries were included in in vitro embryo production routines (PIV). Rate of COC recovery was submitted to t test. Cleavage and blastocyst rate were expressed in percentage and submitted to Fisher s exact test. All analyses were performed in GraphPad Pisma v5.0 program, P < 0.05. One female developed galactorrhoea and was removed from experimental group. In Control group we recovered 18.4±3.21 of COC I, cleavage rate was 55.97% and blastocyst rate was 33.99%.In Treated group we recovered 8.3±1.15 of COC I, cleavage rate was 60.24% and blastocyst rate was 36%. Statistical difference was only observed in COC recovery, were treated cats had fewer than control group. Although we didn¿t found differences on embryo production, individual variation must be considered. Experiment 2 We aimed to evaluate in vivo embryo production, trough pregnancies, and also identify estrogen (ER-¿) and progesterone (PgR) receptors in uterus and FSH (FSH-R) and LH (LH-R) receptors in ovaries from queen treated with deslorelin acetate. We used 25 queens and one tom, 15 queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) for 3 months. After that, all implants were removed and estrous and ovulation was induced. After 24hs five queens were maintained with one tom and mating was allowed (Pregnancy group), 30 days after the last mating pregnancy was confirmed using ultrasound. The other 10 treated queens were spayed three days after ovulation induction, such as the control group queens. All ovaries and uterus were submitted to immunohistochemistry evaluation (ER-¿ and PgR in uterus and LH-R and FSH-R in ovaries). Fisher exact test with 2x2 contingency tables was used as statistical analysis (p < 0.05). Deslorelin acetate was effective in suppress reproductive activity and estrus and ovulation were performed successfully. None of the cats got pregnant and one developed pyometra. ER-¿ expression had a discrete decline in treated animals PgR was complex and variable, being reduced to almost null in some treated cats. FSH-R and LH-R were similar in both groups. We concluded that the first induced estrous after deslorelin acetate treatment in domestic cats should be considered infertile and that the gestational failure observed probably occurred due to alterations in uterine PgR expression.