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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-205375

Resumo

A toxocaríase é uma doença parasitária que atinge milhões de pessoas no mundo. Devido à dificuldade na realização do diagnóstico clínico, pela inespecificidade de sintomas, os testes imunoenzimáticos são utilizados para a detecção de anticorpos produzidos contra o Toxocara canis. Entretanto, por utilizar antígenos de excreção e secreção liberados pelo T. canis (TES), o que é um procedimento demorado, ainda necessita aprimorar em sensibilidade e especificidade. Com isso, uma forma de aumentar a qualidade do teste diagnóstico seria a obtenção dos componentes proteicos do TES na forma recombinante, o que permitiria a produção do antígeno em larga escala. Por se conhecer pouco sobre todos os componentes proteicos do TES o objetivo deste estudo foi então verificar quais proteínas estão presentes nesse material. Para isso, inicialmente foi feito o isolamento de ovos embrionados de T. canis, seguido do cultivo das larvas do parasito a fim de obter o TES. Após a purificação do antígeno, foi feita a separação das proteínas presentes nesse material através de eletroforese em gel unidimensional. A partir da separação das proteínas em bandas, de acordo com o seu peso molecular, elas foram digeridas em tripsina para serem analisados os seus peptídeos através de espectrometria de massa. Os resultados mostraram a presença de oito proteínas em diferentes faixas de peso molecular, sendo que do total, somente quatro eram específicas de T. canis mucinas, contig 17, contig 245 e nucEST: AA873900. As outras proteínas foram identificadas como sendo compartilhadas pelos nematódeos Caenoharbiditis elegans UPF392, C. briggsae CBG18883, CBG02165, C. japonica uma proteína sem caracterização e do filarídeo Loa loa - actina. Através deste estudo foram obtidas informações adicionais sobre os componentes do TES, os quais poderão ser utilizados no desenvolvimento de novos testes diagnósticos para a toxocaríase.

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The toxocariasis is a parasitic disease that affects millions of people worldwide. Due to the difficulty in clinical diagnosis, by nonspecific symptoms the enzyme immunoassays are used to detect antibodies produced against Toxocara canis. . However, to use excretion and secretion antigens released by T. canis (TES), which is a lengthy procedure, still need to improve sensitivity and specificity. Thus, one way to increase the quality of the diagnostic test would be to obtain the protein components. of the TES in recombinant form, which allow the large scale production of the antigen. By knowing little about all the protein components of the TES the objective of this study was then determine which proteins are present in this matherial. To determine which proteins are present in TES was initially done isolation of the T. canis embryonated eggs followed by cultivation of the parasite larvae in order to obtain the secreted antigen. After purification of the antigen was made to separate the proteins present in this material by one-dimensional electrophoresis gel. From the separation of protein bands according to their molecular weight, they were digested in trypsin for their peptides are analyzed by mass spectrometry. The results show the presence of eight proteins in different molecular weight ranges, and the total, only four were specific from T. canis - mucins, contig 17, contigs 245 and nucEST: AA873900. The other proteins were identified as being shared by Caenoharbiditis elegans nematodes - UPF392, C. briggsae - CBG18883, CBG02165, C. japonica - a protein without characterization heartworm and Loa loa actin.Through this study were obtained additional information about the components of the TES, which can be used to develop new diagnostic tests for toxocariasis.

Biblioteca responsável: BR68.1