AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE DO TOXOIDE ÉPSILON DE Clostridium perfringens TIPO D COM DIFERENTES ADJUVANTES

RESUMO

Clostridium perfringens tipo é um bacilo anaeróbio, de ampla distribuição geográfica, podendo ser encontrado no solo, pastagens, água doce e salgada e como habitante normal do trato digestivo dos animais e do homem. É o principal micro-organismo produtor da toxina épsilon. Essa toxina tem ação necrótica e letal, provocando aumento da permeabilidade da mucosa intestinal, edema em vários órgãos, hidropericárdio e lesões renais. A enterotoxemia é a principal doença causada pelo Clostridium perfringens tipo D em ovinos, caprinos e bovinos, submetidos a fatores predisponentes, como mudança brusca na alimentação e alteração na microbiota intestinal. Trata-se de uma doença altamente letal, ocorrendo, na maioria dos casos, morte dos animais durante as primeiras 6 a 18 horas de infecção. Por sua rápida evolução e gravidade, o controle da doença baseia-se em medidas de manejo e em vacinações sistemáticas dos rebanhos. As vacinas comerciais possuem o toxoide adsorvido em hidróxido de alumínio, porém, em muitos casos, a eficiência destas vacinas não é boa, promovendo apenas uma proteção parcial, níveis de anticorpos protetores de curta duração e/ou estímulo de resposta celular deficiente (LOBATO, 2000). O interesse de estudar novos adjuvantes para uso em vacinas é antigo e de grande importância na medicina veterinária. Associado ao aumento de vacinas desenvolvidas com subunidades purificadas (que são mais seguras, porém menos imunogênicas), pesquisadores buscam o desenvolvimento de sistemas de liberação que promovam a estimulação eficiente do sistema imunológico. De modo geral espera-se que o adjuvante promova uma elevada e prolongada resposta imune, além de direcionar essa resposta imune para uma resposta protetora, evitando a doença (MOTA, 2006). O objetivo desse trabalho é o desenvolvimento de novas formulações de vacinas com diferentes candidatos a adjuvantes, utilizando o toxoide épsilon como modelo. Foram desenvolvidas vacinas contendo microemulsão e micropartículas de quitosana, como adjuvantes. As formulações de micropartícula de quitosana foram caracterizas quanto ao tamanho, potencial zeta e morfologia. A potência das vacinas foi avaliada por imunização em coelhos, seguida de titulação dos soros em células MDCK. O hidróxido de alumínio foi utilizado como adjuvante padrão, por ser o mais utilizado comercialmente em vacinas contra a toxina épsilon.

ABSTRACT

Clostridium perfringens is an anaerobic bacillus widely distributed and can be found in soil, pastures, water and as normal inhabitant of the digestive tract of animals and mans. It is the major microorganism producer of epsilon toxin. This toxin have lethal and necrotizing action, causing increased permeability of the intestinal mucosa, edema, hydropericardium and renal lesions. The enterotoxemia is the main disease caused by Clostridium perfringens type D in sheep, goats and cattle, submitted to predisposing factors, such as sudden change in diet and changes in intestinal microbiota. This is a highly lethal disease, occurring in most cases death of the animals, during the first 6 to 18 hours of infection. For being a rapid disease progression and severity, its control is based on management measures and in systematic vaccination of flocks. The commercial vaccines have toxoid adsorbed in aluminum hydroxide, but in many cases the effectiveness of these vaccines is not good, promoting only partial protection, protective antibody levels of short duration (LOBATO, 2000). The interest in studying new adjuvants for use in vaccines is old and of great importance in the veterinary medicine. Associated with increased of vaccines developed with purified subunits (which are safer, but less immunogenic), researchers seek to develop delivery systems that promote the efficient stimulation of the immune system. In general it is expected that the adjuvant promotes a high and prolonged immune response and direct this immune response to a protective response, avoiding the disease (MOTA, 2006). The aim of this work is the development of new formulations of vaccines with different candidates the adjuvants, using the epsilon toxoid as a model. Vaccines have been developed containing microemulsion and chitosan microparticles as adjuvants. The chitosan microparticle formulations was characterized s by size, zeta potential and morphology. The potency of the vaccines was evaluated by immunization of rabbits, followed by titration of the sera in MDCK cells. Aluminum hydroxide was used as standard adjuvant, for being the most used commercially in vaccines against epsilon toxin.