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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206340

Resumo

A importância econômica e de saúde pública no Brasil da cisticercose bovina, causada pela forma larval de Taenia saginata, tem sido comprovada pela sua alta frequência constatada em abatedouros frigoríficos. Em razão da baixa sensibilidade do método de controle (inspeção post mortem) na identificação de carcaças com infecções discretas, estudos visando o desenvolvimento de métodos alternativos para o seu diagnóstico, como os testes sorológicos são de alta prioridade. Nesta pesquisa foram desenvolvidos e avaliados os desempenhos dos testes Dot-Blot e ELISA para o diagnóstico da cisticercose bovina, ambos utilizando antígeno purificado de larva de T. crassiceps. Para isso, os extratos proteicos do antígeno bruto de larva de T. crassiceps foram fracionados por cromatografia de exclusão molecular de alta resolução, em coluna Superdex 75 10/300 GL. Para o desenvolvimento dos métodos diagnósticos foram utilizadas frações específicas desses extratos. Após a padronização, para a determinação do desempenho de cada teste, foram realizados ensaios utilizando 80 soros de bovinos positivos para a cisticercose (40 naturalmente e 40 experimentalmente infectados com ovos de T. saginata), 40 soros de bovinos negativos para a cisticercose e 40 soros de bovinos diagnosticados com outras doenças. As taxas de desempenho obtidas para o Dot-Blot foram de 93,8% de sensibilidade, 87,5% de especificidade e 90,6% de acurácia; sendo observado reações cruzadas com animais com fasciolose, hidatidose e tuberculose. Já os resultados obtidos pelo ELISA foram de 93,8% de sensibilidade, 95,0% de especificidade e 94,4% de acurácia; com reação cruzada observada com fasciolose. O uso de frações específicas do antígeno de larva de T. crassiceps, forneceu, para ambos os testes alto poder discriminatório entre animais doentes e não doentes. As sensibilidades, tanto o DotBlot quanto o ELISA, foram superiores a apresentada pela inspeção post mortem em detectar animais infectados naturalmente; tornando possível a aplicação destes em investigações epidemiológicas da doença. Conclui-se que a escolha da técnica deve se pautar, principalmente, na disponibilidade de recursos e equipamentos, uma vez que o Dot-Blot pode ter menor custo e não depende de equipamentos para a sua realização, ao contrário do ELISA.

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In Brazil, bovine cysticercosis, a disease caused by the larval form of Taenia saginata, has been proven to be important for the economy and for public health, given its high frequency in slaughterhouses and cold stores. The method of control (postmortem inspection) to identify carcasses with mild infections has low sensitivity; therefore, research studies on the development of alternative methods for diagnosis, such as serological tests, are an urgent priority. In the present research, Dot-Blot and ELISA tests were developed and evaluated for performance in the diagnosis of bovine cysticercosis, both using purified antigen of T. crassiceps larvae. For this purpose, the protein extracts of the crude antigen of T. crassiceps larvae were fractionated by high-resolution size exclusion chromatography, in a Superdex 75 10/300 GL column. Specific fractions of these extracts were used for the development of diagnostic methods. After standardization, in order to measure the performance of each test, assays were conducted with 80 bovine sera tested positive for cysticercosis (40 naturally-infected and 40 experimentally-infected with T. saginata eggs), 40 bovine sera tested negative for cysticercosis and 40 bovine sera diagnosed with other diseases. Performance rates obtained for Dot-Blot were 93.8% sensitivity, 87.5% specificity and 90.6% accuracy; there was cross-reactivity with animals diagnosed with fascioliasis, hydatid disease and tuberculosis. By comparison, the results of ELISA showed 93.8% sensitivity, 95.0% specificity and 94.4% accuracy, and there was cross-reaction with fascioliasis. By using specific fractions of the antigen of T. crassiceps larvae, both tests could distinguish sick animals from non-sick ones very accurately. Both Dot-Blot and ELISA were more sensitive than post-mortem inspection to detect naturally-infected animals; thus, they can be applied in epidemiological research on this disease. In conclusion, the choice of technique should be based primarily on the availability of resources and equipment, since the use of Dot-Blot may have lower costs and does not depend on equipment, unlike ELISA.

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