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EFEITOS DA SERICINA DO BICHO DA SEDA (Bombyx mori) SOBRE OS FENÓTIPOS NUCLEARES E NA REPARACAO DA LESAO ULCERATIVA EM CÉLULAS DO EPITÉLIO CORNEAL DE RATOS DIABÉTICOS

KARINA ELIANA HERENCIA BUENO.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206361

Resumo

A córnea de pacientes diabéticos pode desenvolver defeitos epiteliais que comprometem a visão e causam dor. Os efeitos do diabetes sobre algumas características das células epiteliais corneais, notadamente os fenótipos nucleares, são ainda desconhecidos. A sericina é um polímero extraído do casulo do bicho-da-seda, que, aparentemente, promove reparação corneal em ratos. Com esta pesquisa estudou-se a produção lacrimal, o limiar de sensibilidade corneal (Cochet-Bonnet) e a pressão dos olhos de ratos com três semanas de diabetes induzido por aloxana (glicemia sérica 400 mg/dL). Os efeitos da instilação diária (a cada 6 horas, por quatro dias) de sericina 10% sobre a cinética de reepitelização de córneas cauterizadas (com álcali), em ratos diabéticos, foram estudados e comparados aos efeitos de placebo (solução salina balanceada) e de soro equino (uma opção terapêutica vigente). A pesquisa traz, também, informações sobre o tamanho dos núcleos (área e perímetro), o estado de compactação e a textura da cromatina, o conteúdo de DNA (ploidia) e a distribuição das regiões organizadoras de nucléolos impregnadas por íons prata (AgNORs) em células epiteliais corneais de ratos diabéticos (hiperglicêmicos) e de não diabéticos (normoglicêmicos). Os núcleos das células que reepitelizaram as córneas cauterizadas, após tratamento com sericina 10%, solução salina balanceada ou soro, foram avaliados. Os resultados mostraram que os olhos dos ratos diabéticos diferiram dos de não diabéticos quanto ao limiar de sensibilidade corneal ao toque (2,07 ± 0,52 cm nas córneas de diabéticos vs. 4,00 ± 0,56 cm nas de não diabéticos; p = 0,01). Relativamente à cinética de reepitelização, os tempos de fechamento das úlceras foram de 30 horas para as córneas tratadas com sericina 10% ou com soro e de 36 horas para as que receberam solução salina balanceada. Os núcleos das células epiteliais das córneas dos diabéticos, exceto em amostras que receberam sericina 10%, apresentaram cromatina compactada, em comparação aos núcleos das células do epitélio corneal dos ratos não diabéticos. Núcleos com tendência à tetraploidia só não foram observados no epitélio corneal dos ratos não diabéticos. Todos os epitélios apresentaram frequências reduzidas de núcleos sub-diploides. As córneas dos ratos diabéticos apresentaram núcleos com frações reduzidas de áreas AgNOR positivas. Em conclusão, o diabetes alterou a supra-organização cromatínica e a ploidia em células epiteliais corneais em ratos diabéticos aloxênicos com três semanas de hiperglicemia. A sericina 10%, aparentemente, reduz ou inibe estímulos que alteram a funcionalidade da cromatina das células epiteliais corneais em ratos diabéticos. Ademais, mostrou-se tão efetiva quanto o soro na promoção da reepitelização corneal
The cornea of diabetic patients can develop epithelial defects that promote vision deficit and pain. The effects of diabetes/hyperglycemia on some characteristics of corneal epithelial cells, notably the nuclear phenotypes are still unknown. The sericin is a polymer extracted from the cocoons of the silkworm, which seems to promote reepithelization of burned cornea in rats. In this study, tear production, corneal touch threshold (Cochet-Bonnet) and intraocular pressure of alloxan-induced diabetes rats with three weeks of hyperglycemia (serum glucose 400 mg/dL) were studied. In addition, the effects of daily instillation (every 6 hours for 4 days) of 10% sericin over re-epithelization kinetics of burned corneas from diabetic were also studied and compared to the effects of placebo (balanced salt solution) and horse serum (an actual therapeutic option). The research also brings information about the size of the nuclei (area and perimeter), the state of compactation and the texture of chromatin, the DNA content (ploidy) and the distribution of silver-stained nucleolar organizing regions (AgNORs) of epithelial cells in corneas of diabetic (hyperglycemic) and non-diabetic rats (normoglycemic). Nuclear phenotypes of cells that participated of the re-epithelization of the burned corneas after treatment with 10%sericin, balanced salt solution or serum were studied. Results showed that the eyes of diabetic rats did not differ from the ones from non-diabetic ones, just like the tear production and intraocular pressure, but differences regarding the corneal touch threshold (2.07 ± 0.52 cm in the corneas of diabetic vs. 4.00 ± 0.56 cm in non-diabetics; p = 0.01) were found. Regarding re-epithelization kinetics, the healing time of the burns were 30 hours for corneas treated with 10% sericin or serum and 36 hours in those receiving 0balanced salt solution. The nuclei of epithelial cells in the corneas of diabetic patients, except in samples that received 10% sericin, showed more condensed chromatin than the cell nuclei from the corneal epithelium of non-diabetic rats. Nuclei with trend to the tetraploidy were not observed only in the corneal epithelium of non-diabetic rats. All epithelia showed reduced frequency of sub-diploid nuclei. The corneas of the diabetic rats showed nuclei with reduced fractions of positive AgNOR areas. As conclusion, diabetes altered chromatin supra-organization and ploidy levels in corneal epithelial cells of rats with 3 weeks of hyperglycemia. Instillation of 10% sericin seems reduce or block stimulus that affect DNA/chromatin during diabetes, while it promotes re-epithelization
Biblioteca responsável: BR68.1