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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206438

Resumo

As aves são consideradas o principal reservatório de Campylobacter spp., um importante patógeno de origem alimentar e a carne e subprodutos de frango são descritos como os principais veiculadores deste microrganismo. A crescente seleção de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluoroquinolonas, classe de antimicrobiano frequentemente utilizada na avicultura e na medicina humana, é motivo de preocupação em todo o mundo e diversos estudos são realizados para avaliar a real contribuição do uso destes antimicrobianos na produção animal e na resistência bacteriana a estes antimicrobianos. Dentre os conhecidos mecanismos de resistência em Campylobacter spp., o sistema de efluxo CmeABC, é apontado por desempenhar importante papel na resistência a diferentes antimicrobianos e a compostos tóxicos. Objetivou-se com este estudo obter cepas de Campylobacter spp. a partir do conteúdo cecal de frangos de corte e investigar a resistência à enrofloxacina e a participação do sistema de efluxo CmeABC na aquisição de resistência a esse antimicrobiano. Foram investigadas para a presença desse sistema de efluxo, 159 cepas de Campylobacter spp., sendo 55 cepas de C. jejuni e 25 de C. coli obtidas de frangos de criação orgânica, 30 cepas de C. coli e 19 cepas de C. jejuni de criação convencional e 7 cepas de C. jejuni e 23 de C. coli obtidas de frangos de matadouros comerciais. A detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC foi realizada pela Polymerase Chain Reaction (PCR). O nível de resistência das cepas foi investigado em 26 cepas pela determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) da enrofloxacina pelo método de diluição em ágar com e sem o uso de um inibidor de sistemas de efluxo Phenylalanine Arginine -Naphthylamide (PaN) para a confirmação da atividade deste sistema. Da totalidade (n=159) de cepas analisadas para a presença do sistema de efluxo, foi verificada a presença dos genes cmeA, cmeB e cmeC em 94,3% das cepas. Nove cepas (5,7%) não apresentaram o sistema de efluxo completo. O gene cmeA não foi detectado em uma cepa de C. jejuni e em uma de C. coli. Outra cepa de C. coli, não continha os genes cmeB e cmeC, enquanto outras cinco não possuíam o gene cmeB. Não foi detectado nenhum gene da bomba CmeABC em apenas uma cepa de C. coli. No teste de diluição em ágar, todas as cepas foram resistentes ou apresentaram resistência intermediária à enrofloxacina com CIM variando de 0,5g/mL a 32g/mL. Com o uso do inibidor da bomba de efluxo, foi observada redução significativa da CIM de enrofloxacina. Este estudo permitiu concluir que a CIM da enrofloxacina é elevada em cepas de Campylobacter sendo o sistema de efluxo CmeABC muito frequente e ativo na presença de enrofloxacina, determinando redução significativa da CIM .Este sistema pode estar atuando como um mecanismo sinérgico a outros mecanismos de resistência em Campylobacter spp. Sugere-se que o uso de inibidores da bomba de efluxo podem ser uma ferramenta na redução da resistência antimicrobiana e na colonização de Campylobacter em animais de produção.

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Poultry are considered the main reservoir of Campylobacter spp., an important foodborne pathogen and meat and chicken by-products are described as the main carriers of this microorganism. The growing selection of Campylobacter spp. resistant to fluoroquinolones, an antimicrobial class frequently used in poultry and human medicine, is a worldwide concern and several studies are conducted to evaluate the real contribution of the use of these antimicrobials in animal production and bacterial resistance to these antimicrobials. Among the known mechanisms of resistance in Campylobacter spp., the CmeABC efflux system is considered to play an important role in resistance to different antimicrobials and toxic compounds. The aim of this study was to obtain strains of Campylobacter spp. from the cecal content of broiler chickens and investigate resistance to enrofloxacin and the participation of the CmeABC efflux system in the acquisition of resistance to this antimicrobial. A total of 159 strains of Campylobacter spp., 55 strains of C. jejuni and 25 strains of C. coli obtained from organic broilers, 30 strains of C. coli and 19 C. jejuni strains from convencional breeding, and 7 strains of C. jejuni and 23 C. coli obtained from chickens from commercial slaughterhouses were investigated for the presence of this efflux system. Detection of the cmeA, cmeB and cmeC genes was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The level of strains resistance was investigated in 26 strains by determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of enrofloxacin by the agar dilution method with and without the use of the Phenylalanine Arginine -Naphthylamide (PaN) an efflux pump inhibitor to confirmation the activity of this system. From the total (n = 159) of strains analyzed for the presence of the efflux system, the genes cmeA, cmeB and cmeC genes were detected in 94.3% of the strains, nine strains (5.7%) did not present the efflux system complete. The cmeA gene was not detected in a strain of C. jejuni and one C. coli. Another of C. coli did not present the cmeB and cmeC genes, while another five did not present the cmeB gene. No CmeABC pump gene was detected in only one C. coli strain. In the agar dilution test, all strains were resistant or had intermediate resistance to enrofloxacin and presented MIC ranging from 0.5 g / mL to 32 g / mL. With the use of the efflux pump inhibitor, enrofloxacin MIC decreased significantly. This study allowed us to conclude that the MIC of enrofloxacin is elevated in Campylobacter strains and the CmeABC efflux system is very frequent and active in the presence of enrofloxacin, determining a significant reduction of MIC. This system may be acting as a synergistic mechanism to other resistance mechanisms in Campylobacter spp.. It is suggested that the use of efflux pump inhibitors (EPI) may be a tool in reducing antimicrobial resistance and in colonization of Campylobacter in production animals.

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