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ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DERIVADAS DO TECIDO ADIPOSO DE BOVINOS

TATICIA LIEH IKEDA.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206455

Resumo

As células-tronco mesenquimais (CTM) representam uma atrativa ferramenta para a medicina regenerativa, a engenharia de tecidos e a terapia celular. Na espécie bovina, as pesquisas sobre a caracterização de CTM ainda são raras, principalmente utilizando-se o tecido adiposo como fonte de obtenção. Com o objetivo de isolar e caracterizar CTM derivadas do tecido adiposo de bovinos, foram utilizadas amostras de seis vacas e isoladas CTM por meio de digestão enzimática e cultivo celular em monocamada. As células em primeira (P0) e terceira passagem (P3) foram, então, submetidas a caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo. A diferenciação osteogênica e adipogênica foi avaliada microscopicamente após 10 dias de indução e por qPCR em tempo real após 3 e 15 dias de indução. Foram obtidas células fibroblastóides e aderentes ao plástico. Estas apresentaram, na citometria de fluxo, marcação positiva para CD44 (86,6 % em P0 e 76,6 % em P2) e vimentina (82,48 % em P2), baixa marcação de CD34 (8,7 % em P0 e 1,8 % em P2) e marcação negativa para MHC II (2,1 % em P0 e 2,3 % em P2). Na avaliação microscópica, todas as amostras responderam positivamente às diferenciações nas linhagens osteogênica e adipogênica, além de apresentarem expressão de osteopontina e colágeno tipo I e PPAR-, respectivamente, pelo qPCR em tempo real. Não foi observada a expressão de osteocalcina em nenhuma amostra submetida a indução osteogênica. Os resultados obtidos indicam o tecido adiposo de bovinos como uma fonte viável de CTM para medicina regenerativa e terapia celular.
Mesenchymal stem cells (MSC) are an interesting tool for regenerative medicine, tissue engineering and cell therapy. In bovine species, MSC are not well described. Therefore, the aim of this study was to isolate and characterize bovine MSC obtained from adipose tissue. Samples from six cows were used to isolate MSC by enzymatic digestion followed by monolayer culture. These cells were, then, submitted to immunophenotyping by flow cytometer at first (P0) and third (P2) passages. Osteogenic and adipogenic differentiation potential was evaluated microscopically after 10 days of induction and by Real Time qPCR after 3 and 15 days of induction. Cells showed plastic-adherent characteristic and fibroblastoid morphology. They expressed CD 34 (8,7 % at P0 e 1,8 % at P2), CD44 (86,6 % at P0 e 76,6 % at P2)and vimentin (82,48 % at P2) and did not express MHC II (2,1 % at P0 e 2,3 % at P2). All samples showed potential to differentiate into osteogenic and adipogenic lineages and expressed osteopontin and collagen type I and PPAR-, respectively. Osteocalcin was not expressed in any sample. Our results shows the possibility of using bovine adipose tissue as a source of MSC for regenerative medicine and cell therapy. ¨¨
Biblioteca responsável: BR68.1