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Aspectos morfológicos e moleculares de carrapatos do complexo Amblyomma maculatum

GIOVANI SANTOS DE ABREU JUNIOR.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206584

Resumo

O objetivo do presente estudo foi comparar os aspectos morfológicos e moleculares das populações de carrapatos do complexo Amblyomma maculatum do Estado do Maranhão com de outras localidades do Brasil, depositadas na Coleção Nacional de carrapatos da Universidade de São Paulo. Foram coletados espécimes do município de Bacurituba (02° 42' 21" S 44° 44' 16" O) no Estado do Maranhão e comparadas com espécimes da Coleção 10 Nacional de Carrapatos da Universidade de São Paulo. Os carrapatos do Maranhão foram 11 coletados de suínos (Sus scrofa domesticus) criados em regime extensivo e transportados para a Universidade de São Paulo. A primeira geração de carrapatos reproduzidas em 13 laboratório foi obtida a partir de oito progenitoras nativas do Maranhão. Os carrapatos 14 foram acondicionados em potes de plásticos devidamente identificados e acondicionados 15 em estufa BOD com 27 C e 90% UR Após a eclosão, as fases imaturas foram postas para a 16 infestação em Cavia porcellus até a obtenção das fases adultas, alvo do estudo 17 comparativo. Os espécimes foram identificados por chave e foram mensurados utilizando-18 se do Microscópio Carl Zeiss modelo SteREO Discovery.V12 e seu software ZEN para 19 mensuração das variáveis: Comprimento da Coxa I e Espinho I (esquerdos e diretos), Coxa 20 IV e Espinho IV (esquerdos e direitos), Comprimento e Largura do Capítulo. A extração de 21 DNA para as análises moleculares foi realizada de acordo com o protocolo Isotiocianato de 22 Guanidina (GT). Uma vez extraído o DNA, foram submetidos a dois protocolos de reação 23 em cadeia pela polimerase (PCR). Dois marcadores foram utilizados buscando amplificar 24 fragmentos de aproximadamente 460-pb do gene mitocondrial 16S rRNA e 1200-pb do 25 segundo espaço transcrito interno (ITS2) do DNA ribossômico nuclear. Os espécimes de 26 fêmeas e machos foram avaliados morfologicamente e identificados como Amblyomma 27 triste. Indivíduos da Coleção Nacional de Carrapatos Danilo Gonçalves Saraiva foram 28 comparados com os espécimes do presente estudo. Observou-se diferença estatística 29 (P<0,05) para as dimensões (Coxa direita I/ Espinho direto I; Coxa direita IV/Espinho 30 direito IV; Coxa esquerda IV/Espinho esquerdo IV) dos Espinhos da Coxa I e Coxa IV. 31 Não houve diferença estatística (P>0,05) para a razão do Comprimento do Capitulo pela 32 Largura do Capitulo. Para as fêmeas, observou-se diferença estatística para espinho direito 33 I, coxa esquerda I, espinho esquerdo I e largura do capitulo. As sequências obtidas quando 34 comparadas, de acordo com o gene mitocondrial 16S rRNA e sequências derivadas do ITS2 35 ribossômico nuclear, observa-se que os espécimes encontrados no Maranhão apresentam 36 similaridade com Amblyomma maculatum oriundo dos Estados Unidos.
The objective of the present study was to compare the morphological and molecular aspects 6 of the tick populations of the Amblyomma maculatum complex of the State of Maranhão 7 with those of different regions of Brazil stored in Coleção Nacional de Carrapatos of 8 Universidade de São Paulo. Specimens were collected from the municipality of Bacurituba 9 (02 ° 42 '21 "S 44 ° 44' 16" W) in the State of Maranhão and compared with specimens 10 from the National Collection of Ticks of the Universidade de São Paulo. Maranhão ticks 11 were collected from swine (Sus scrofa domesticus) raised in an extensive regime and 12 transported to the Universidade de São Paulo. The ticks were stored in properly identified 13 plastic pots and placed in a BOD incubator with 27 C and 90% RH. After the ticks were 14 hatched, the immature phases were placed for infestation in Cavia porcellus until the adult 15 phases were reached, the study's target comparative. The specimens were identified by key 16 and were measured using the Carl Zeiss Microscope model SteREO Discovery.V12 and its 17 ZEN software to measure the variables: Thigh and Thigh I length (left and right), Thigh IV 18 and Thorn IV (left And rights), Chapter Length and Width. DNA extraction for the 19 molecular analyzes was performed according to the Guanidine Isothiocyanate (GT) 20 protocol. Once the DNA was extracted, they were submitted to two polymerase chain 21 reaction (PCR) protocols. Two markers were used to amplify approximately 460-bp 22 fragments of the mitochondrial 16S rRNA and 1200-bp gene from the second internal 23 transcript space (ITS2) of nuclear ribosomal DNA. The specimens of females and males 24 were morphologically evaluated and identified as Amblyomma triste. Specimens from the 25 National Collection of Ticks "Danilo Gonçalves Saraiva" were compared with the 26 specimens of the present study. Statistical difference (P <0.05) was observed for the 27 dimensions (Right thigh I / Right thigh I, Right thigh IV / Right thigh IV, Left thigh IV / 28 Left thigh IV) Thigh Thighs I and Thigh IV. There was no statistical difference (P> 0.05) 29 for the length of the Chapter Length by Chapter Width. For females, statistical difference 30 was observed for right spur I, left thigh I, left spur I and section width. Sequences obtained 31 when compared, according to the mitochondrial 16S rRNA gene and sequences derived 32 from the nuclear ribosomal ITS2, it is observed that the specimens found in Maranhão have 33 similarity to Amblyomma maculatum from the United States.
Biblioteca responsável: BR68.1