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Extração de DND genômico bacteriano, cinética e parâmetros ruminais em ovinos alimentados com dietas contendo glicerina bruta oriunda da produção de biodiesel a partir de óleos de fritura

ELIZANGELA SOARES MENEZES.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207123

Resumo

Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação da glicerina bruta (GB) a partir de óleo residuais de fritura sobre a riqueza e composição da comunidade bacteriana, consumo, cinética e parâmetros ruminais em ovinos deslanados. O experimento foi conduzido no Módulo Didático de Caprinovinocultura da Universidade Federal do Piauí, UFPI CPCE. Foram utilizados quatro ovinos fistulados, com aproximadamente 54,5 ± 3,5 kg, dois anos de idade, distribuídos em um quadrado latino 4 × 4, cada período experimental foi constituído por 10 dias de adaptação e 5 dias de coleta de dados. Utilizou-se níveis crescentes de glicerina bruta de 0, 2,5, 5 e 7,5% da matéria seca (MS) do concentrado em substituição ao milho, em dietas isoproteicas, tendo como base volumosa o capim elefante (Pennisetum purpureum Schum), na proporção de 60%. Para a avaliação da eficácia do protocolo HotSHOT na extração de DNA genômico da microbiota bacteriana ruminal as amostras do líquido ruminal foram obtidas pela filtragem do conteúdo ruminal coletado na porção ventral do rúmen antes da alimentação matinal no 15º dia de cada período experimental. Para a extração do DNA bacteriano foi utilizado um protocolo modificado empregando-se o método HotSHOT, sendo a sua quantificação e pureza determinada pela a espectrofotometria. Foi constado que todos os pellet de DNA apresentavam a presença de contaminantes que não foram eliminados no processo de extração, no entanto, valores da pureza de DNA próximos a 1.5, conforme os obtidos no presente estudo, podem ser considerados satisfatórios para utilização em PCR. Após eletroforese em gel de agarose 1%, foi possível visualizar a presença de DNA genômico, fornecendo indícios da eficiência do protocolo de HotSHOT. Para determinar a degradabilidade do concentrado foi usada a técnica in situ, com sacos de TNT, contendo 0, 6,25, 12,50 e 18,75% de GB, sendo avaliados os tempos 0, 3, 6, 12, 18, 24, 48 e 72 horas de permanência no rúmen. Contrastes ortogonais foram testados para efeitos linear e quadrático, bem como os efeitos de 0% de GB na dieta e em comparação com os outros tratamentos e 2,5% vs 5 e 7,5% de GB, sendo estes significativos quando o P-value for 0,05 e considerado tendência quando P0,10. As dietas com GB não interferiram no consumo de MS e PB, entretanto, observou-se um efeito linear crescente no consumo de EE. Não houve interação do tempo em relação aos tratamentos sobre o pH, porém observou-se uma tendência linear crescente do pH após a inclusão da GB e valores mínimos deste parâmetro entre 2 e 4 horas pós-prandial (5,83 e 5,87, respectivamente). A fermentação ruminal foi alterada apresentando efeito quadrático na concentração de nitrogênio amoniacal, com valor mínimo de 8mg/dL ao nível de 4,11% de inclusão da GB (P<0,05). Constatou-se um efeito linear decrescente sobre a suplementação em relação ao desaparecimento da fração potencialmente solúvel (B) (P<0,05) e tendência linear decrescente da degradabilidade potencial (DP) da MS (P0,10). A degradabilidade efetiva (DE) da MS a taxa de passagem de 8%.h-1 aumentou linearmente (P<0,05), enquanto observou-se uma tendência linear decrescente (P0,10) da DE a uma taxa de passagem de 5%.h-1 e da fração indegradável (ID). Em relação a cinética da degradabilidade da proteína bruta (PB), foi verificado efeito linear crescente (P<0,05) da taxa degradação c da fração potencialmente solúvel e da DE em todos os tempos de passagem, enquanto e do tempo de colonização (TC) dos microrganismos diminuiu linearmente. Os resultados deste trabalho indicam que a suplementação em até 7,5% de GB em ovinos Santa Inês não causa efeitos negativos sobre o consumo e os parâmetros de fermentação ruminal, melhorando a degradação efetiva dos nutrientes.
The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation of crude glycerin (GB) from residual frying oil on the richness and composition of the bacterial community, consumption, kinetics and ruminal parameters in sheep. The experiment was conducted in the Caprinovinocultura Didactic Module of the Federal University of Piauí, UFPI - CPCE. Four fistulated sheep, with approximately 54.5 ± 3.5 kg, two years old, were distributed in a 4 × 4 Latin square, each experimental period consisting of 10 days of adaptation and 5 days of data collection. Increasing levels of crude glycerin of 0, 2.5, 5 and 7.5% of the dry matter (DM) of the concentrate in substitution of maize were used in isoprotein diets, based on voluminous elephantgrass (Pennisetum purpureum Schum) , In the proportion of 60%. In order to evaluate the effectiveness of the HotSHOT protocol in the extraction of genomic DNA from the ruminal bacterial microbiota, ruminal fluid samples were obtained by filtering the ruminal contents collected in the ventral portion of the rumen before morning feeding on the 15th day of each experimental period. For the extraction of bacterial DNA a modified protocol was used using the HotSHOT method, its quantification and purity being determined by spectrophotometry. It was found that all DNA pellets had the presence of contaminants that were not eliminated in the extraction process, however, values of DNA purity close to 1.5, as obtained in the present study, can be considered satisfactory for use in PCR. After 1% agarose gel electrophoresis, it was possible to visualize the presence of genomic DNA, providing indications of the efficiency of the HotSHOT protocol. In order to determine the degradability of the concentrate, the in situ technique was used with TNT bags containing 0, 6,25, 12,50 and 18.75% of GB, being evaluated the times 0, 3, 6, 12, 18, 24, 48 and 72 hours of rumen residues. Orthogonal contrasts were tested for linear and quadratic effects, as well as the effects of 0% GB on diet and compared to other treatments and 2.5% vs 5 and 7.5% GB, these being significant when the P- Value is 0.05 and considered a trend when P0.10. The diets with GB did not interfere in the consumption of DM and CP, however, there was an increasing linear effect on EE consumption. There was no interaction of time in relation to treatments on pH, but a linear trend of increasing pH after inclusion of GB and minimum values of this parameter between 2 and 4 hours postprandial (5,83 and 5,87, respectively). The ruminal fermentation was altered, showing a quadratic effect on the concentration of ammoniacal nitrogen, with a minimum value of 8mg / dL at the level of 4.11% inclusion of GB (P <0.05). A linear decreasing effect on supplementation was observed in relation to the disappearance of the potentially soluble fraction (B) (P <0.05) and a decreasing linear trend of the potential degradability (PD) of the DM (P0.10). The effective degradability (SD) of MS, the 8% .h-1 pass rate increased linearly (P <0.05), while a decreasing linear trend (P0.10) was observed for a 5% .h-1 and the undegradable fraction (UD). In relation to the degradability kinetics of the crude protein (PB), the linear effect increasing (P <0.05) of the degradation rate "c" of the potentially soluble fraction and of the DE was verified in all the times of passage, whereas e of the time of Colonization (TC) of the microorganisms decreased linearly. The results of this work indicate that the supplementation of up to 7.5% of GB in Santa Inês sheep does not cause negative effects on ruminal consumption and fermentation parameters, improving the effective degradation of nutrients.
Biblioteca responsável: BR68.1