Óleo essencial de Lippia alba (Mill.) N. E. Brown e Aloysia triphylla (L'her.) Britton como aditivo na dieta para Tilapia-do-Nilo.

RESUMO

Capítulo 1 A crescente preocupacao com a resistencia bacteriana e a restricao ao uso de antibioticos promotores de crescimento tem estimulado a busca por produtos naturais com atividade antimicrobiana e como adjuvantes de antibioticos sinteticos em patogenos de interesse na piscicultura. Objetivou-se com este trabalho identificar e quantificar os constituintes quimicos e avaliar a atividade antimicrobiana dos oleos essenciais de Aloysia triphylla (OEAT) e Lippia alba (OELA), bem como a atividade antibiofilme e sinergica com o florfenicol sobre isolados de Aeromonas spp. A atividade antimicrobiana foi avaliada atraves da microdiluicao em caldo pela concentracao bactericida minima (CBM) em 28 isolados de Aeromonas spp. A formacao do biofilme foi avaliada em 21 isolados. Para a atividade sinergica de OEAT e OELA com o florfenicol utilizou-se a tecnica do checkerboard. Os principais constituintes de OEAT foram -citral (39,91%), E-carveol (25,36%) e limoneno (21,52%) e, em OELA; linalool (81,64%) foi o constituinte mais abundante. Os isolados avaliados apresentaram susceptibilidade aos dois oleos essenciais com CBM entre 195,31 e 3125 L/mL. Com relacao a producao de biofilme, 2 isolados foram classificados como nao produtores, 3 como moderados e 16 como fraco produtores. Os oleos essenciais interferiram no biofilme na etapa inicial de formacao, passando de moderados a fraco produtores, entretanto em biofilme consolidado, estes nao causaram interferencia. Os OEAT e OELA combinados com o florfenicol reduziram a CBM e o indice da concentracao inibitoria variou de 0,09 a 0,49, demonstrando efeito sinergico. Conclui-se que os oleos essenciais testados possuem atividade antimicrobiana frente a Aeromonas spp., interferem na etapa inicial de formacao de biofilme e quando combinados com o florfenicol, apresentaram efeito sinergico por meio da reducao na dose minima do antibiotico. Capítulo 2 Os oleos essenciais contem compostos bioativos com propriedades que aumentam a funcao imune e promovem o crescimento e saude dos peixes. Os peixes (n=200) foram aleatoriamente distribuidos em 5 tratamentos (quatro repeticoes) em 20 caixas (100 L). Um total de cinco tratamentos (0-controle; 0,25; 0,50; 1,0 e; 2 mL/kg de oleo essencial de Aloysia triphylla - OEAT) foram adicionados a dieta de tilapia do Nilo (Oreochromis niloticus) com o objetivo de investigar desempenho, hematologia, parametros bioquimicos e enzimas intestinais. Adicionalmente foram desafiadas com Aeromonas spp. Com o aumento da inclusao de OEAT na dieta de juvenis de tilapia do Nilo ocorreu melhora dos parametros de desempenho. As maiores concentracoes de OEAT na dieta refletiram em aumento da atividade da lipase e protease intestinais, atividade de lisozima plasmatica, glicose, albumina, ALT, proteinas totais plasmaticas, eritrocitos, hematocrito e reducao da atividade de amilase intestinal, triglicerideos plasmaticos, hemoglobina e indices hematimetricos. A adicao do OEAT na dieta nao afetou a sobrevivencia de juvenis de tilapia do Nilo desafiados com Aeromonas spp. Conclui-se que a suplementacao de 2,0 mL/kg de OEAT na dieta melhora o desempenho, aumenta a producao de enzimas intestinais lipase e protease alcalina e a atividade da lisozima plasmatica, podendo ser utilizado como promotor de crescimento e imunoestimulante para juvenis de tilapia do Nilo. Capítulo 3 O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da adicao de diferentes concentracoes de oleo essencial de Lippia alba (OELA), no desempenho, hematologia, parametros bioquimicos e imunologicos e resistencia a infeccao por Aeromonas spp. Os peixes (n=300) foram divididos aleatoriamente em 20 caixas de 1000 L. Os niveis de OELA na dieta foram 0 (controle); 0,25; 0,5; 1,0 e 2,0 mL/kg. Ao final de 45 dias, foi realizada biometria e determinacao de hematocrito, hemoglobina, concentracao de hemoglobina corpuscular media (CHCM), glicose, colesterol, triglicerideos, proteinas totais, albumina, globulina e relacao albumina/globulina, alem da atividade de lisozima do plasma (n=12 peixes por tratamento). Adicionalmente, realizou-se desafio pela inoculacao da bacteria Aeromonas spp. para avaliacao de sobrevivencia por um periodo de 14 dias (n=28 peixes por tratamento). Nao houve mortalidade durante o periodo do desempenho. O ganho de peso medio aumentou nas maiores concentracoes de OELA utilizadas. As maiores concentracoes de OELA na dieta aumentaram hematocrito, hemoglobina, glicose, colesterol, albumina, relacao albumina/globulina e lisozima do plasma; e reduziram as concentracoes de CHCM, triglicerideos, proteinas totais e globulina do plasma. A sobrevivencia de peixes apos infeccao de Aeromonas spp. aumentou proporcionalmente com o aumento do OELA na dieta. Conclui-se que a suplementacao de 1,0 a 2,0 mL/kg de OELA na dieta e benefico ao desenvolvimento de juvenis de tilapia do Nilo, pois apresentou papel imunoestimulante, nao provocou alteracoes metabolicas e promoveu aumento de crescimento, alem de contribuir para o aumento da sobrevivencia em desafio com Aeromonas spp.

ABSTRACT

Chapter 1 Increasing concern about bacterial resistance and the restriction of the use of antibiotics for growth promotion has stimulated the search for natural products with antimicrobial activity and as adjuvants of synthetic antibiotics in pathogens of interest in fish farming. The objective of this work was to identify and quantify the chemical constituents and to evaluate the antibacterial activity of Aloysia triphylla (EOAT) and Lippia alba (EOLA) essential oils, as well as the antibiofilm and synergistic activity with florfenicol on Aeromonas spp. The antimicrobial activity was evaluated through broth microdilution by minimum bactericidal concentration (MBC) in 28 isolates of Aeromonas spp. Biofilm formation was evaluated in 21 isolates. For the synergistic activity of EOAT and EOLA with florfenicol, the checkerboard technique was used. The main constituents of EOAT were -citral (39.91%), E-carveol (25.36%) and limonene (21.52%) and, in EOLA; Linalool (81.64%) was the most abundant constituent. The evaluated isolates presented susceptibility to two essential oils with MBC between 195.31 and 3125 L/mL. Regarding the production of biofilms, 2 isolates were classified as non-producers, 3 as moderates and 16 as non-producers. The essential oils interfered in the biofilm in the initial stage of formation, from moderate to weak producers, however in consolidated biofilm, they did not cause interference. EOAT and EOLA combined with florfenicol resulted deresead MBC and the inhibitory concentration index ranged from 0.09 to 0.49, demonstrating a synergistic effect. It is concluded that the essential oils tested have an antimicrobial activity against Aeromonas spp., Interfere in the initial stage of biofilm formation and when combined with florfenicol, showed a synergic effect by reducing the minimum dose of the antibiotic. Chapter 2 Essential oils contain bioactive compounds with properties that increase immune function and promote fish growth and health. Fish (n = 200) were randomly distributed in 5 treatments (four replications) into 20 boxes (100 L). Five treatments (0-control, 0.25, 0.50, 1.0 and 2 mL / kg Aloysia triphylla essential oil - EOAT) were added to the diet of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) to investigate performance, hematology, biochemical parameters and intestinal enzymes. Additionally they were challenged with Aeromonas spp. The increase of the inclusion of EOAT in the juvenile diet of Nile tilapia, an improvement of the performance parameters was observed. The higher concentrations of EOAT in the diet reflected increased activity of intestinal lipase and protease, plasma lysozyme activity, glucose, albumin, ALT, total plasma proteins, erythrocytes and hematocrit, and reduced intestinal amylase activity, plasma triglycerides, hemoglobin and hematimetric indexes. The addition of EOAT in the diet did not affect the survival of Nile tilapia juveniles challenged with Aeromonas spp. It is concluded that the supplementation of 2.0 mL / kg OEAT in the diet improves the performance, increases the production of intestinal enzymes lipase and alkaline protease and the activity of plasma lysozyme and can be used as a growth promoter and immunostimulant for juvenile Nile tilapia. Chapter 3 The objective of this study was to evaluate the effect of the addition of different concentrations of essential oil of Lippia alba (EOLA) on performance, hematology, biochemical and immunological parameters and resistance to infection by Aeromonas spp. Fish (n = 300) were randomly divided into 20 tanks (1000 L). EOLA levels in the diet were 0 (control); 0.25; 0.5; 1.0 and 2.0 mL/kg. At the end of 45 days, biometrics and hematocrit, hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin (MCH) and glucose, cholesterol, triglycerides, total proteins, albumin, globulin and albumin/globulin ratio and plasma lysozyme activity were determined (n = 12 fish per treatment). In addition, challenge was carried out by the inoculation of the bacterium Aeromonas spp. For survival evaluation over a period of 14 days (n = 28 fish per treatment). There was no mortality during the performance period. The mean weight gain increased at the highest EOLA concentrations used. The highest concentrations of OELA in the diet increased hematocrit and hemoglobin and plasma glucose, cholesterol, albumin, albumin/globulin ratio and lysozyme and reduced the concentration of MCH and plasma triglycerides, total proteins and globulin. The survival of fish after infection of Aeromonas spp. increased proportionally with the increase in EOLA in the diet. It is concluded that the supplementation of 1.0 to 2.0 mL/kg of EOLA in the diet is beneficial to the development of juvenile Nile tilapia, since it presented immunostimulatory role, did not provoke metabolic alterations and promoted growth increase, besides contributing to increase survival in challenge with Aeromonas spp.