DETECÇÃO DE BETA-LACTAMASES DE ESPECTRO ESTENDIDO (ESBLs) EM ISOLADOS DE SALMONELLA PROVENIENTES DE CARNES DE FRANGO

RESUMO

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil fenotípico e genotípico da susceptibilidade antimicrobiana, e o possível envolvimento de enzimas ESBLs em isolados oriundos de carnes de frango. Foram utilizados 18 isolados de Salmonella Heidelberg (SH) e 9 de S.Enteritidis (SE) pertencentes a bacterioteca do Laboratório de Biologia Molecular, Imunologia e Microbiologia (LABMIM) da Universidade do Estado de Santa Catarina (UDESC) também isoladas de carnes de frango no estado do Paraná foram utilizadas. Os 27 isolados de SE e SH foram submetidos aos teste de disco-difusão para definir o Índice de Resistência Múltipla aos Antimicrobianos (IRMA) e a Resistência a Múltiplas Drogas (MDR) utilizando-se os seguintes antimicrobianos amoxicilina associado ao ácido clavulânico, ácido nalidíxico, cefotazima, ceftazidima, ceftiofur, ceftriaxone, enrofloxacina, estreptomicina, gentamicina, e tetraciclina. Foi considerado multirresistente o isolado que apresentou resistência a três ou mais classes de antimicrobianos. Outro teste realizado foi o disco-aproximação com o intuito de averiguar zonas de inibição interpostas, indicativas da produção de enzimas beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Nos isolados de SH que apresentaram multirresistência (18/18) foi realizada a pesquisa de genes de resistência relacionados às ESBLs, sendo eles blaCMY-2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 e AmpC através da técnica de PCR. A resistência geral encontrada foi de 17,77% e 80,55% para SE e SH, respectivamente. Os maiores níveis de resistência foram observados para o ácido nalidíxico, onde ambos sorovares foram 100% resistentes, seguido do ceftiofur com 22,22% para SE e 100% para SH. O padrão de resistência mais encontrado foi o B, cujo as classes são penicilina, cefalosporinas, quinolona e tetraciclina, presentes em 42,1 % dos isolados de SH. De acordo com o teste de disco-aproximação não observamos zona de inibição, porém quanto a pesquisa dos genes de resistência via beta-lactamases de espectro estentido (ESBLs), detectamos cinco dos sete genes avaliados sendo que a média de prevalência dos genes estudados foi de 26,18%, onde os genes blaTEM-1, blaCMY-2 e AmpC obtiveram maior amplificação (83,33%, 38,88% e 38,88%, respectivamente). Os genes blaOXA-1 e blaPSE-1 não foram detectados. Estes resultados certamente denotam preocupação por se tratar de uma bactéria que causa doença em humanos e que pode estar presente em carnes de frango, com elevado perfil de resistência as cefalosporinas de terceira geração, sendo esta a classe de antimicrobianos mais utilizada no tratamento e controle das salmoneloses humana e animal.

ABSTRACT

The objective of this study was to evaluate the phenotypic and genotypic profile of antimicrobial susceptibility and the possible involvement of ESBLs enzymes in chicken meat isolates. Eighteen isolates of Salmonella Heidelberg (SH) and nine S.Enteritidis (SE) belonging to bacterioteca from the Laboratory of Molecular Biology, Immunology and Microbiology (LABMIM) of the State University of Santa Catarina (UDESC) were also isolated from chicken meats In the state of Paraná were used. The 27 isolates of SE and SH were submitted to the disc-diffusion test to define the Multiple Antimicrobial Resistance Index (IRMA) and Multiple Drug Resistance (MDR) using the following antimicrobial agents amoxicillin associated with clavulanic acid, Nalidixic, cefotazime, ceftazidime, ceftiofur, ceftriaxone, enrofloxacin, streptomycin, gentamicin, and tetracycline. The isolate that presented resistance to three or more classes of antimicrobials was considered multidrug resistant. Another test was the disc-approximation in order to investigate interposed inhibition zones, indicative of the production of extended spectrum beta-lactamase enzymes (ESBLs). In the isolates of HS that presented multiresistance (18/18) the resistance genes related to ESBLs were investigated blaCMY-2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 and AmpC by the PCR technique. Overall resistance was 17.77% and 80.55% for SE and SH, respectively. The highest levels of resistance were observed for nalidixic acid, where both serovars were 100% resistant, followed by ceftiofur with 22.22% for SE and 100% for SH. The most commonly found resistance pattern was B, whose classes are penicillin, cephalosporins, quinolone and tetracycline, present in 42.1% of SH isolates. We did not observe zone of inhibition according to the disc-approximation test, but when searching for resistance genes via ESBLs, we detected five of the seven genes evaluated, and the mean prevalence of the studied genes was of 26.18%, where the blaTEM-1, blaCMY-2 and AmpC genes obtained higher amplification (83.33%, 38.88% and 38.88%, respectively). The blaOXA-1 and blaPSE-1 genes were not detected. The multiresistance profile possibly justified by the presence of resistance genes involved with ESBLs. These results are certainly of concern because it is a bacterium that causes disease in humans and can be present in chicken meat, with a high resistance profile to third generation cephalosporins, being this the class of antimicrobials most used in the treatment and control of human and animal salmonellosis.