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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207643

Resumo

O presente trabalho foi realizado com o objetivo de caracterizar a enzima conversora de angiotensina (ECA) antes e após a criopreservação do sêmen de touros Gir Leiteiro. Foram utilizados ejaculados de cinco touros sexualmente maduros. Após a coleta, uma alíquota de 1ml foi retirada para análise com o sêmen fresco, e o restante foi submetido ao processo de criopreservação, sendo mantido em nitrogênio líquido até o momento da análise do sêmen descongelado a 37ºC por 30 segundos. O sêmen fresco, após a coleta, e o criopreservado após a descongelação, foram centrifugados duas vezes com TALP para retirada do plasma e do diluidor, respectivamente. As amostras foram então submetidas às técnicas de western blot, imunocitoquímica e atividade enzimática. Através do western blot com anticorpo monoclonal anti-ECA, foi possível observar uma banda de 100 kDa em todos os cinco touros analisados, sendo que a intensidade dessas bandas diminuiu 70% (p<0,05) após a criopreservação. A imunocitoquímica revelou uma localização periacrossomal da ECA, sendo que a área corada pelo anticorpo fluorescente diminuiu significativamente (p<0,05) após a criopreservação. A atividade enzimática foi avaliada através da hidrólise do substrato FAPGG, a qual foi significativamente menor (p<0,05) no sêmen criopreservado quando comparado ao sêmen fresco. Portanto, o processo de criopreservação leva a diminuição da intensidade das bandas de ECA, da área corada na imunocitoquímica e na atividade enzimática da ECA no sêmen de touros Gir Leiteiro

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The objective of this study was to characterize the angiotensin-converting enzyme (ACE) before and after cryopreservation of semen from bulls Gyr. The ejaculates of five sexually mature bulls were used. After collection, a 1ml aliquot was removed for analysis with fresh semen, and the rest was submitted to the cryopreservation process, being kept in liquid nitrogen until the analysis of the thawed semen at 37ºC for 30 seconds. Fresh semen after collection and cryopreserved after thawing were centrifuged twice with TALP for plasma and diluent withdrawal, respectively. The samples were submitted to western blot, immunocytochemistry and enzymatic activity. Through the western blot with anti-ACE monoclonal antibody, it was possible to observe a band of 100 KDa in all five bulls analyzed, and the intensity of these bands decreased 70% (p <0.05) after cryopreservation. Immunocytochemistry revoked a periacrossomal localization of ACE, and the area stained by fluorescent antibody decreased significantly (p <0.05) after cryopreservation. The enzymatic activity was evaluated by the hydrolysis of the FAPGG substrate, which was significantly lower (p <0.05) in cryopreserved semen when compared to fresh semen. Therefore, the cryopreservation process leads to a decrease in the intensity of the ECA bands, the stained area in immunocytochemistry and in the enzymatic activity of ACE in Gyr bull semen. 589

Biblioteca responsável: BR68.1