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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207953

Resumo

Parasitos do gênero Trypanosoma são microrganismos unicelulares e flagelados que pertencem à família Trypanosomatidae. O presente estudo descreve pela primeira vez o encontro de dois isolados do gênero Trypanosoma, um infectando naturalmente o carrapato Rhipicephalus microplus e o outro infectando naturalmente o carrapato Amblyomma brasiliense. Ambos isolados foram caracterizados através de análises moleculares, morfométricas e biológicas. As culturas de Trypanosoma foram obtidas através do isolamento em linhagens celulares de IDE8 e mantidas meio de cultivo L15B, incubadas em estufas bacteriológicas a 30ºC. Os isolados obtiveram um bom rendimento de propagação em meio L15B nas temperaturas de 300C, 320C e 340C. A cultura permaneceu estável com mais de 14 passagens de propagação em cultura axênica com meio L15B à temperatura de 30ºC. A criopreservação da cultura do isolado apresentou viabilidade após descongelamento pelo armazenamento em nitrogênio líquido. Foi realizada a curva de crescimento e análise das formas evolutivas dos isolados em meio axênico e nas linhagens celulares IDE8 e DH82. A análise das sequências nucleotídicas obtidas com alvos dirigidos para a região 18S rDNA e 24S rDNA comprovaram a autenticidade dessas novas espécies. As sequências nucleotídicas descritas foram depositadas no Genbank. A microscopia eletrônica de varredura e análise morfométrica revelaram ampla diversidade morfológica das duas espécies denominadas Trypanosoma rhipicephalis sp. nov. cepa P1RJ e Trypanosoma amblyommi sp. nov. cepa C1RJ. A citometria de fluxo associada à microscopia de fluorescência comprovou a internalização de ambos os isolados de Tripanosomatídeos em células das linhagens IDE8 e DH82 mesmo com a inibição da fagocitose celular. Aspectos relacionados à patogenicidade, envolvimento com hospedeiros vertebrados, epidemiologia, ciclo evolutivo e mecanismos de transmissão ainda são desconhecidos. Portanto, serão necessários mais estudos para o conhecimento de aspectos do ciclo biológico de Trypanosoma rhipicephalis sp. nov. e Trypanosoma amblyommi sp. nov.

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Parasites of the genus Trypanosoma are unicellular and flagellated microorganisms from the Trypanosomatidae family. This study describes for the first time the encounter of two isolates of the Trypanosoma genus naturally infecting Rhipicephalus microplus and Amblyomma brasiliense characterized through molecular, morphological and biological analyzes. Trypanosoma cultures were obtained by isolation in IDE8 cell lines and maintained in L15B culture environment, incubated at 30°C. The isolates obtained had a good yield spread in an L15B environment at temperatures of 30oC, 32ºC and 34ºC. The culture remained stable over 14 spread passages in axenic culture in L15B environment at a temperature of 30°C. Cryopreservation of the isolated culture presented viability after thawing due to liquid nitrogen storage. The curve of growth and analysis of the evolutionary forms of the isolates in the axenic environment and the cell lines IDE8 and DH82 were performed. The analysis of nucleotide sequences obtained with goals directed at the region 18S rDNA and 24S rDNA confirmed the authenticity of this new species. The nucleotide sequences described were deposited to Genbank. Scanning electron microscopy and morphometric analysis revealed a wide morphological diversity of the two described species. Flow cytometry associated with fluorescence microscopy confirmed the internalization of both Trypanosomatid isolates in cells from the IDE8 and DH82 lines even with the inhibition of cellular phagocytosis. Pathogenicity-related aspects, involvement in vertebrate hosts, epidemiology, evolutionary cycle and transmission mechanisms are still unknown. Therefore, more studies will be necessary for the knowledge of life cycle aspects of Trypanosoma rhipicephalis sp. nov. and Trypanosoma amblyommi sp. nov.

Biblioteca responsável: BR68.1