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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207976

Resumo

GUIMARÃES, Andresa. Métodos De Diagnóstico Molecular E Metagenômico De Agentes Anaplasmataceae Em Felinos Domésticos (Domiciliados E Errantes) E Gambás Da Região Metropolitana Do Rio De Janeiro. 2017. 62p. Tese (Doutorado em Medicina Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. Os agentes Anaplasmataceae são bactérias gram-negativas que são encontradas em leucócitos, plaquetas ou eritrócitos, formando mórulas, características de sua infecção. A transmissão desses agentes para o homem e animais ocorre principalmente por vetores artrópodes. A participação dos felinos domésticos e dos reservatórios silvestres ainda não são definidos, havendo poucos estudos sobre as hemoparasitoses que acometem estes animais. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de infecção pelos agentes da família Anaplasmataceae em felinos domésticos e gambás (Didelphis sp) do estado do Rio de Janeiro, por meio de métodos moleculares. Buscou-se sequenciar as amostras positivas na PCR para validação das mesmas e compará-las com aquelas depositadas no Genbank, assim como desenvolver novos métodos de diagnóstico visando resultados rápidos e de alto rendimento, como o deep sequencing, usado em ensaios de metagenômica. Também objetivou-se determinar quais alterações hematológicas (hemograma, alterações morfológicas celulares e inclusões de hemoparasitas) são mais frequentes e quais fatores associados estão relacionados a estas em duas populações de gatos distintas da Região Metropolitana do Rio de Janeiro. Foram estudadas duas populações de gatos domésticos, gatos errantes (n=105) e gatos domiciliados (n=178) da região Metropolitana do Rio de Janeiro. Também foram estudados 37 gambás recolhidos da natureza para reabilitação, estes foram testados para os mesmos agentes que os gatos. O diagnóstico de Ehrlichia canis, E. chaffeensis e Anaplasma spp. foi realizado por Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Na comparação entre as duas populações de gatos, houve diferenças significativas entre elas (p<0,05), revelando que a população de errantes apresentava valores hematológicos fora do padrão para a espécie, sendo trombocitopenia, eosinofilia e hiperproteinemia os achados mais relevantes, em contrapartida a população de gatos domiciliados apresentou-se, em média, dentro dos parâmetros de referência para a espécie. Apenas um animal (0.56%) da população de gatos domiciliados foi positivo para Ehrlichia chaffeensis baseado no gene 16S rRNA, os demais felinos foram negativos para todos os agentes estudados. Apenas um gambá (2.7%) foi positivo na PCR para E. canis e E. chaffeensis simultaneamente, após sequenciamento demonstrou 100% de identidade com E. canis. Parte das populações de gatos foi submetida ao diagnóstico por deep sequencing, onde foi observado que os gêneros de bactérias patogênicas presentes com maior frequência nestas populações são: Mycoplasma e Bartonella, também foram identificadas diversas bactérias presentes na microbiota de felinos domésticos. Pode-se concluir que condições ambientais e de manejos interferem nos parâmetros hematológicos dos gatos domésticos, por isso a diferença entre domiciliados e errantes. Este é o primeiro relato de E. chaffeensis na população de gatos domésticos do Rio de Janeiro. Uma nova cepa de E. canis circula na população de gambás peridomiciliados do Rio de Janeiro. Sequenciamento de nova geração e estudos metagenômicos são formas de diagnóstico e ferramentas de estudo da microbiota dos animais domésticos e devem ser mais difundidos na Medicina Veterinária.

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GUIMARÃES, Andresa. Molecular and Metagenomic Diagnostic Methods of Anaplasmataceae Agents in Domestic Felids (Domiciled and Errant) and Opossums of Metropolitan Region of Rio de Janeiro. 2017. 62p. Thesis (Doctorate in Veterinary Medicine). Veterinary Institute, Federal Rural University of Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. Anaplasmataceae agents are gram-negative bacteria that are found in leukocytes, platelets or erythrocytes, forming morulae, characteristic of their infection. The transmission of these agents to man and animals occurs mainly by arthropod vectors. The participation of domestic felines and wild reservoirs has not yet been defined, with few studies on hemoparasitosis affecting these animals. The present study had as objective to investigate the presence of infection by Anaplasmataceae family agents in domestic felines and possums (Didelphis sp.) of the state of Rio de Janeiro, using molecular methods. We sought to sequence the PCR positive samples for validation of the same and to compare them with those deposited in Genbank, as well as to develop new diagnostic methods aiming at fast and high yield results, such as "deep sequencing", used in metagenomic assays. The aim of this study was to determine which hematological changes (hemogram, hematological morphology and hemoparasite inclusions) are more frequent and which associated factors are related to these in two distinct cat populations in the Metropolitan Region of Rio de Janeiro. Two populations of domestic cats, wandering cats (n = 105) and domiciled cats (n = 178) from the Metropolitan region of Rio de Janeiro were studied. Also, were studied 37 opossums collected from nature for rehabilitation, these were tested for the same agents as cats. The diagnosis of Ehrlichia canis, E. chaffeensis and Anaplasma spp. was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR). In the comparison between the two populations of cats, there were significant differences between them (p <0.05), revealing that the wandering population had non-standard haematological values for the species, being thrombocytopenia, eosinophilia and hyperproteinemia the most relevant findings. In contrast, the population of domiciled cats presented, on average, within the reference parameters for the species. Only one animal (0.56%) of the domiciled cats population was positive for Ehrlichia chaffeensis based on the 16S rRNA gene, the other cats were negative for all the agents studied. Only one opossum (2.7%) was positive in the PCR for E. canis and E. chaffeensis simultaneously, after sequencing demonstrated 100% identity with E. canis. Part of the populations of cats was submitted to the diagnosis by deep sequencing, where it was observed that the genera of pathogenic bacteria present in these populations are: Mycoplasma and Bartonella, several bacteria were also present in the domestic feline microbiota. It can be concluded that environmental and management conditions interfere in the hematological parameters of domestic cats, so the difference between domiciled and errant. This is the first report of E. chaffeensis in the domestic cat population of Rio de Janeiro. A new strain of E. canis circulates in peridomicile opossum population of Rio de Janeiro. New generation sequencing and metagenomic studies are diagnostic forms and tools for studying the microbiota of domestic animals and should be more widespread in Veterinary Medicine.

Biblioteca responsável: BR68.1