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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208303

Resumo

A criopreservação e o transplante de tecido ovariano (TO) têm sido uma alternativa promissora para preservar e restaurar a fertilidade de pacientes, jovens ou adultas, com câncer sob o risco de infertilidade devido aos danos causados pela quimio e/ou radioterapias. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a regeneração da função ovariana após auto e xenotransplante de TO caprino fresco ou vitrificado. O estudo foi realizado em três fases distintas: Fase I: Autotransplante ortotópico de tecido ovariano caprino fresco ou vitrificado; Fase II: Autotransplante heterotópico e cultivo in vitro de tecido ovariano fresco ou vitrificado e Fase III: Xenotransplante de tecido ovariano caprino fresco ou vitrificado. Nas Fases I e II, o TO foi enxertado na curvatura menor do útero e na cavidade peritoneal, por um período de 6 e 3 meses, respectivamente. Já na fase III, o TO foi enxertado na cavidade peritoneal de camundongos BALB/nude. Na Fase I, após recuperação do TO foi observado um aumento significativo da progesterona nas cabras que receberam TO fresco. Embora o percentual de folículos preantrais morfologicamente normais (FPMN) tenha sido similar entre o TO fresco (controle) e o transplante fresco, nesta condição, a densidade folicular foi significativamente inferior ao controle. Na Fase II, após três meses de transplante, três folículos antrais foram observados na superfície do TO de enxertos fresco ou vitrificado. Nessa fase, o percentual de FPMN no TO oriundo do controle, transplante fresco ou vitrificado, foi similar. Os níveis séricos de estradiol não foram alterados durante o período de transplante, por outro lado, após 7 dias de cultivo in vitro do TO vitrificado ou não, os níveis de progesterona e estradiol reduziram significativamente. As proteínas SDF-1 e Cx37 foram detectadas nos oócitos e células da granulosa de folículos presentes no TO fresco, vitrificado ou apenas cultivado, porém, no TO vitrificado e cultivado, a Cx37 foi encontrada apenas nas células da granulosa. A Cx43 foi detectada nas células da granulosa, células da teca e na zona pelúcida de folículos em todos os tratamentos. Na Fase III, o percentual de FPMN no TO vitrificado ou vitrificado e transplantado foi significativamente reduzido, comparado ao TO fresco ou transplantado. Além disso, no TO vitrificado o percentual de folículos em desenvolvimento foi significativamente superior ao observado no TO fresco, bem como no TO transplantado não vitrificado. A apoptose avaliada pela expressão de mRNA para a caspase 3 foi significativamente reduzida no TO transplantado após vitrificação ou não, comparado ao TO apenas vitrificado. Em conclusão, em caprinos a função ovariana, bem como os folículos pré-antrais podem se desenvolver até o estágio de folículos antrais após o transplante de TO fresco ou vitrificado. No entanto, muitos esforços ainda precisam ser realizados visando o sucesso completo da técnica de manipulação (transplante ou cultivo in vitro) de folículos pré-antrais após criopreservação.

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Cryopreservation and transplantation of ovarian tissue (OT) have been a promising alternative to preserve and restore the fertility of young and adult patients with cancer under the risk of infertility due to the damage caused by chemo and/or radiotherapies. Therefore, the objective of this study was to evaluate the regeneration of ovarian function after auto and xenotransplantation of fresh or vitrified goat OT. The study was conducted in three distinct phases: Phase I: Orthotopic autotransplantation of fresh or vitrified goat OT; Phase II: Heterotopic autotransplantation and in vitro culture of fresh or vitrified ovarian tissue and Phase III: Xenotransplantation of fresh or vitrified goat ovarian tissue. In Phases I and II, OT was grafted under the curvature minor of the uterus and peritoneal cavity, for 6 and 3 months respectively. In phase III, OT was grafted into the peritoneal cavity of BALB/nude mice. In Phase I, after recovery of OT, it was observed a significant increase of progesterone in goats who received fresh OT. Although the percentage of morphologically normal preantral follicles (MNPF) was similar between fresh OT (control) and fresh transplanted OT, in this condition follicular density was significantly lower than control. In Phase II, after three months of transplantation, three antral follicles were observed on the surface of the OT of fresh or vitrified grafts. In this phase, the percentage of MNPF in the OT from the control, fresh or vitrified transplant, was similar. Serum estradiol level was not altered during the transplantation period. On the other hand, after 7 days of in vitro culture of fresh or vitrified OT, progesterone and estradiol levels significantly reduced. SDF-1 and Cx37 proteins were detected in oocytes and granulosa cells of follicles present in fresh, vitrified or fresh cultured OT. However, in vitrified cultured OT, Cx37 was found only in granulosa cells. Cx43 was detected in granulosa cells, theca cells and the zona pellucida of follicles in all treatments. In Phase III, the percentage of MNPF in vitrified or vitrified and transplanted OT significantly reduced when compared to fresh or transplanted fresh OT. In addition, in vitrified OT, the percentage of developing follicles was significantly higher when compared to fresh OT or non-vitrified transplanted OT. Apoptosis evaluated by mRNA expression of caspase 3 reduced significantly after transplantation of fresh or vitrified OT when compared to the OT only vitrified. In conclusion, in goats, the ovarian function, as well as the preantral follicles, can develop to the antral stage after transplantation of fresh or vitrified OT. However, its still need many efforts to complete the success of the technique of manipulation (transplantation or in vitro culture) of preantral follicles after cryopreservation.

Biblioteca responsável: BR68.1