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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208304

Resumo

A prostatomegalia é um distúrbio reprodutivo comum em cães, e pode acarretar alterações bioquímicas no plasma seminal (PS) e na qualidade espermática. Objetivo: Realizar a caracterização proteômica, bioquímica e físico-química do plasma seminal (PS) de cães com prostatomegalia e avaliar a sua qualidade espermática antes e após congelação-descongelação. Metodologia: Para a comparação dos parâmetros a serem analisados, os animais foram divididos em dois grupos: cães saudáveis (HD, n = 10) e cães com prostatomegalia (PD, n = 10) de acordo com as características da próstata e a presença de hemospermia. Três amostras de sangue de cada animal foram coletadas para a análise da testosterona sérica. Motilidade espermática, vigor, concentração, percentagem de espermatozoides viáveis, com membrana funcional e morfologia espermática normal foram analisados na fração espermática (SRF) dos HD e PD. Osmolaridade, pH, tipos celulares, albumina, hemoglobina, fosfatase ácida, fosfatase alcalina, glicose, triglicerídeos, colesterol, cálcio, fósforo, magnésio e cloreto foram analisados na fração prostática (PF). Para análise proteômica, inicialmente separou-se as proteínas da SRF e PF de HD por eletroforese unidimensional, e as proteínas foram identificadas por nano-HPLC-MS. Em seguida, comparou-se as proteínas da SRF e da PF de HD e de PD. Nesta segunda fase, as proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional, e identificadas pela espectrometria de massa ESI-Q-TOF. Finalmente, realizou-se a criopreservação do sêmen de HD e PD com TRIS e o PF autólogo como diluidores. Ambos os diluíres foram adicionados de gema de ovo (20%) e glicerol (6%). Além dos parâmetros espermáticos já avaliados, avaliou-se a atividade mitocondrial e análise computadorizada após descongelação. Resultados: Cães PD apresentaram menor motilidade, vigor, concentração e membrana funcional dos espermatozoides, e maior concentração de glicose, triglicerídeos e colesterol na PF. A glicose foi o único constituinte correlacionado positivamente com testosterona e volume prostático. A eletroforese unidimensional da SRF e PF de HD permitiu a detecção de 268 proteínas nas duas frações. Dezessete proteínas estavam presentes somente na SRF e ausentes na PF. Arginina esterase e lactotransferrina (LTF) foram a proteína com maior intensidade observada nas duas frações. As proteínas UPF0764 C16orf89 homolog e epididymal-specific lipocalin-9 foram os mais abundantes na SRF. Pela eletroforese bidimensional da SRF e PF de HD e PD, verificou-se que a albumina, olfactomedina 4, arginina esterase e LTF foram as mais expressas na SRF de PD. Clusterina, LTF e albumina influenciaram os parâmetros espermáticos. Na FP, foram identificadas somente as proteínas 12 toll-like receptor 10 (TLR10) e a arginina esterase, e elas foram mais abundantes em PD. A arginina esterase foi positivamente relacionada ao volume prostático. A testosterona não influenciou a expressão de nenhuma proteína. Na criopreservação do sêmen, PD apresentaram qualidade espermática inferior a HD. O LP autólogo apresentou resultados semelhante ao TRIS. Conclusão: Cães PD apresentam baixa qualidade espermática. A glicose, os triglicerídeos e o colesterol da PF podem ser usados como biomarcadores de prostatomegalia. SP canino é constituído de uma grande diversidade de proteínas, com propriedades e funções bioquímicas distintas. Algumas destas proteínas são exclusivas da SRF. A prostatomegalia influencia a expressão da clusterin, albumina e LTF na SRF, e que elas estão relacionadas à baixa qualidade espermática de PD. TLR10 e arginina esterase são importantes biomarcadores do aumento prostático em cães. Como o protocolo utilizado, não é recomendada a utilização do sêmen de cães PD em programa de reprodução. Entretanto, recomenda-se a utilização do LP autólogo como diluidor na criopreservação do sêmen de cães saudáveis.

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Prostatomegaly is a common reproductive disorder in dogs, and it can trigger to biochemical changes in seminal plasma (SP) and sperm quality. Objective: Analyze the proteomic, biochemical and physicochemical characterization of the SP of dogs with prostatomegaly and and to evaluate their sperm quality before and after freezing-thawing. Methods: Animals were divided into two groups: healthy dogs (HD) and dogs with prostatomegaly (PD) according to the characteristics of the prostate and the presence of hemospermia. Three blood samples from each animal were collected for analysis of serum testosterone. Motility, vigor, concentration, viable spermatozoa, functional membrane and normal morphology of spermatozoa were analyzed in the sperm fraction (SRF) of HD and PD. Osmolality, pH, cell types, albumin, hemoglobin, acid phosphatase, alkaline phosphatase, glucose, triglycerides, cholesterol, calcium, phosphorus, magnesium and chloride were analyzed in the prostatic fraction (PF). For proteomic analysis, initially, SRF and PF HD proteins were separated by one-dimensional electrophoresis, and the proteins were identified by nano-HPLC-MS. Subsequently, in second phase, the SRF and PF proteins of HD and PD were separated by two-dimensional electrophoresis and identified by ESI-Q-TOF mass spectrometry. Finally, HD semen and PD semen was cryopreserved with TRIS and autologous PF as diluents. Egg yolk (20% and glycerol (6%) were added to the two diluents. Motility, vigor, concentration, spermatozoa with functional membrane and normal morphology, mitochondrial activity and computerized analysis (SCA version 3.2.0) of semen were evaluated after thawing. Results: PD showed lower motility, vigor, concentration and functional membrane of spermatozoa, and higher concentration of glucose, triglycerides and cholesterol in PF. Glucose was the only constituent correlated positively with testosterone and prostate volume. The one-dimensional electrophoresis of SRF and PF of HD allowed the detection of 268 proteins in both fractions. Seventeen proteins were present only in SRF and absent in FP. Arginine esterase and lactotransferrin (LTF) were the protein with the highest intensity observed in both fractions. The UPF0764 C16orf89 homologues and epididymal-specific lipocalin-9 proteins were the most abundant in SRF. By two-dimensional electrophoresis of SRF and FP of HD and PD, albumin, olfactomedin 4, arginine esterase and LTF were found to be the most expressed in SRF of PD. Clusterin, LTF and albumin influenced the sperm parameters. In FP, only toll-like receptor 10 (TLR10) and arginine esterase were identified, and they were more abundant in PD. Arginine esterase was positively related to prostate volume. Testosterone did not influence the expression of any protein. In cryopreservation of semen, PD presented lower 14sperm quality than HD. Autologous LP presented a similar result to TRIS. Conclusion: PD present low sperm quality. Glucose, triglycerides, and PF cholesterol can be used as biomarkers of prostatomegaly. Canine SP is composed of a great diversity of proteins, with different biochemical properties and functions. Some of these proteins are unique to SRF. Prostatomegaly influences the expression of clusterin, albumin and LTF in SRF, and that they are related to the low sperm quality of PD. TLR10 and arginine esterase are important biomarkers of prostatic enlargement in dogs. The semen of PD are not to be used in breeding program. However, the use of autologous LP as a diluent in HD semen cryopreservation is recommended.

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