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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208448

Resumo

As técnicas de criopreservação têm se destacado na aquicultura por viabilizar a estocagem e o transporte de material genético. Para tanto o uso de agentes crioprotetores são comumente empregados, contudo, quando utilizados em altas concentrações podem apresentar efeitos tóxicos. Assim, testes prévios de toxicidade são capazes de estabelecer as concentrações mais eficazes para os protocolos de criopreservação. Este estudo avaliou os efeitos de toxicidade dos agentes crioprotetores dimetilsulfóxido (DMSO), etilenoglicol (EG) e glicerol (GLY) na massa espermática de M. amazonicum. Para o presente experimento, 150 espermatóforos foram coletados de 30 machos de M. amazonicum, usando uma adaptação da técnica de leve compressão abdominal. A massa espermática foi extrusada, formando pools e submetida em DMSO, GLY e EG nas concentrações de 5, 10 e 15% v/v, preparada em solução salina estéril livre de cálcio (Ca-F) durante 30 minutos de tempo de equilíbrio. O percentual de espermatozoides vivos foi determinado por um teste modificado de coloração com eosina-nigrosina e os espermatozoides foram contados em microscópio óptico (40x) com auxílio de um hemicitômetro (câmara de Neubauer). Os resultados foram analisados utilizando análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey HSD e Dunnett a um nível de significância de 5%. De acordo com o teste de toxicidade, o GLY foi o menos tóxico entre os crioprotetores testados em comparação com o controle (P < 0,05) com 47,5 ± 2,2 de espermatozoides vivos. Os testes de toxicidade de DMSO não revelaram diferença estatisticamente significativa (P < 0,05) nas concentrações de 5, 10 e 15% com 18,6 ± 1,8, 19,2 ± 2,0 e 16,5 ± 2,7 de espermatozoides vivos, respectivamente. Para testes com EG, a concentração de 15% resultou em 100% de mortalidade nas células espermáticas testadas. Este estudo sugere que a massa espermática de M. amazonicum pode ser criopreservado utilizando GLY 5% como agente crioprotetor.

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The cryopreservation techniques have been highlighted in aquaculture by enabling the storage and transport of genetic material. For this, the use of cryoprotectants is commonly used, however, when used in high concentrations they may present toxic effects. Thus, prior toxicity tests are able to establish the most effective concentrations for cryopreservation protocols. This study evaluated toxicity effects of cryoprotectants agents dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol (EG) and glycerol (GLY) on Macrobrachium amazonicum sperm mass. For the present experiment, 150 spermatophores were taken from 30 M. amazonicum males, collected using an adapting technique of gentle abdominal compression. The sperm mass were extruded in pools and submitted in DMSO, GLY and EG at concentrations of 5, 10 and 15% v/v, prepared in sterile Calcium Free saline (Ca-F saline) for 30 min of equilibration time. The survival of the sperm was determined by staining with eosin-nigrosin modified and sperm cells were counted in the optical microscope (40x) with the aid of a hemacytometer (Neubauer chamber). Results were analysed using analysis of variance (ANOVA), Tukeys and Dunnetts test at a 5% significance level. According cryoprotectant toxicity assay, GLY was less toxic among the tested cryoprotectants compared to control (P < 0.05) with 47.5 ± 2.2 of viability sperm. DMSO toxicity tests revealed no statistically significant difference (P < 0.05) between 5, 10 and 15% sperm viability with 18.6 ± 1.8, 19.2 ± 2.0 and 16.5 ± 2.7 respectively. For tests with EG, the concentration of 15% resulted in 100% mortality to tested sperm. This study suggests that sperm mass from M. amazonicum can be cryopreserved using GLY 5% as a cryoprotective agent.

Biblioteca responsável: BR68.1