Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208472

Resumo

O gênero Kobuvirus, membro da família Picornaviridae, é dividido em seis espécies Aichivirus A a F. O segmento 3D do genoma do Kobuvirus é uma região conservada, que codifica a enzima RNA polimerase dependente de RNA (RdRP), que é amplamente utilizada para o diagnóstico do vírus. A região genômica que codifica a proteína VP1 do capsídeo viral, região mais variável, é utilizada para estudos filogenéticos em cepas de campo de kobuvírus. Kobuvírus tem sido relacionado à diarreia, principalmente em animais jovens e a infecção por kobuvírus ainda é pouco descrita em animais no Brasil. O objetivo deste estudo foi avaliar características da infecção em duas espécies animais sendo um animal de produção e outro de estimação. O primeiro estudo descreve o envolvimento do kobuvírus (Aichivirus B) em um surto de diarreia em bezerros de um rebanho leiteiro de alta produção. Vinte e quatro amostras fecais diarreicas de bezerros com até 30 dias de idade foram coletadas para análise virológica. Cinco amostras fecais de bezerros assintomáticos foram incluídas nas análises como grupo controle. Utilizando ensaios de RT-PCR, o aichivírus B foi detectado em 54,2% (13/24) e rotavírus A G10P[11] em 25% (6/24) das amostras fecais diarreicas avaliadas. Os bezerros assintomáticos foram negativos para ambos os vírus. Aichivírus B foi identificado apenas em bezerros com até duas semanas de idade com 83,3% (10/12) das amostras positivas. A análise filogenética baseada no gene RdRP agrupou as cepas brasileiras em um novo ramo no cluster Aichivirus B. A análise das sequências de nucleotídeos do gene VP1 das cepas brasileiras e chinesas de Aichivirus B permitiu classificar as cepas brasileiras avaliadas na recém proposta, linhagem 1 (genotipo A). Este é o primeiro relato de alta taxa de detecção de aichivírus B em um surto de diarreia em bezerros leiteiros e também o primeiro estudo filogenético com base no gene VP1 realizado com cepas de campo de Aichivirus B identificadas na América do Sul. O segundo estudo descreve a detecção extra-intestinal de kobuvírus canino (CaKV) em um filhote de Chihuahua de 5 meses de idade com histórico clínico de fezes com sangue de morte natural. Fragmentos de tecido foram submetidos à técnica de histopatologia e imuno-histoquímica (IHC) para identificar antígenos do vírus da cinomose (CDV), parvovírus canino tipo 2 (CPV-2) e adenovírus canino tipos 1 e 2 (CAdV-1 e 2). As técnicas de PCR e RT-PCR foram utilizadas para amplificar genes específicos de CaKV, CDV, CPV-2, CAdV-1 e -2 e herpesvírus canino tipo 1 (CaHV-1). Fragmentos de intestino e amostras de fezes foram avaliados para identificar a presença de rotavírus. As principais alterações patológicas encontradas foram peneumonia intersticial, bronquite necrosante, miocardite, enterite e depleção linfóide. A RT-PCR detectou CaKV no cerebelo, cérebro, pulmão, tonsila e fígado. Neste estudo, também foram identificadas infecções mistas de CaKV com CDV e CPV-2 com CaHV-1. CaKV e rotavírus não foram identificados nas fezes e intestino. Os ensaios IHC detectaram antígenos de CDV e CAdV-1 em regiões distintas dos pulmões. A análise filogenética da cepa de CaKV identificada neste estudo revelou semelhança com cepas detectadas em outros países. Os resultados evidenciam a primeira detecção extra-intestinal de CaKV em tecidos em associação com infecções mistas com outros vírus comumente encontrados em cães e a primeira detecção extra-intestinal de CaKV em um cão. Os resultados obtidos nesse estudo adicionaram novos conhecimentos sobre aspectos clínicos e moleculares da infecção por kobuvírus em animais.

---

The Kobuvirus genus is a member of the Picornaviridae family and subdivided into six species Aichivirus A to F. The 3D segment of the Kobuvirus genome is a conserved genomic region which encodes the enzyme RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) and widely used for the virus diagnosis. The region encoding the protein VP1 of the viral capsid, region more variable, is used to perform phylogenetic studies in kobuvirus field strains. Kobuvirus has been related with diarrhea mainly in young animals and the kobuvirus infection is still little described in animals in Brazil. This study aimed to evaluate characteristics of the infection in two animal species being one of production and another pet. The first study describes the involvement of kobuvirus (Aichivirus B) in a diarrhea outbreak in calves of a high-producing dairy cattle herd. Twenty-four diarrheic fecal samples from calves with up to 30 days old were collected for virological analysis. As control group were collected five fecal samples from asymptomatic calves. Using RT-PCR assays aichivirus B was detected in 54.2% (13/24) and rotavirus A G10P[11] genotypes in 25% (6/24) of diarrheic fecal samples evaluated. Asymptomatic calves were negative for both viruses. Aichivirus B was only identified in calves with up to two weeks old with 83.3% (10/12) of the positive samples. Phylogenetic analysis based on the RdRP gene the Brazilian strains grouped in a new branch within the Aichivirus B cluster. The analysis of the nucleotide sequences of the VP1 gene of the Brazilian and Chinese Aichivirus B strains allowed classified the Brazilian field strains in the putative lineage 1 (genotype A). This is the first report of the high detection rate of aichivirus B in a diarrhea outbreak in dairy calves and also the first phylogenetic study based in VP1 gene of Aichivirus B wild-type strains in South America. The second study describes the extra-intestinal detection of kobuvirus canino (CaKV) in a Chihuahua 5-month-old puppy, with clinical history of bloody-tinged feces of natural death. Tissue fragments were submitted to technique histopathology, and immunohistochemical (IHC) assays to identify the antigens of canine distemper virus (CDV), canine parvovirus-2 (CPV-2), and canine adenovirus types 1 and 2 (CAdV-1and -2). PCR and RT-PCR assays targeted specific genes of CaKV, CDV, CPV-2, CAdV-1 and -2, and canine herpesvirus-1 (CaHV-1). Intestinal fragments and fecal samples were evaluated to identify the presence of rotavirus. The main pathological findings were interstitial pneumonia, necrotizing bronchitis, and myocarditis, enteritis, and lymphoid depletion. The RT-PCR detected CaKV within the cerebellum, cerebrum, lung, tonsil, and liver. Mixed infections of CaKV with CDV, CPV-2, and CaHV-1 were identified by molecular assays. CaKV and RV were not identified within the feces and intestine. IHC assays detected antigens of CDV and CAdV-1 within distinct regions of the lungs. Phylogenetic analysis of the CaKV strains identified in this study was similar to those strains from other geographical regions. The results confirmed the first extra-intestinal detection of CaKV in tissues in association with mixed infections with others viruses commonly found in dogs and the first extra-intestinal detection of CaKV in a dog. The results obtained in this study added new knowledge of clinical and molecular aspects of kobuvirus infection in animals.

Biblioteca responsável: BR68.1